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变形链球菌耐氟菌ffh基因siRNA干扰序列的筛选鉴定
目的 筛选鉴定变形链球菌耐氟菌(UA159-FR)ffh基因的siRNA干扰序列.方法设计合成4段21 bp的核酸[1],利用电穿孔方法转入UA159-FR使其与ffh基因序列靶向位点结合.通过RT-PCR 和Real-time PCR技术验证靶向沉默ffh基因的效果,筛选出佳siRNA干扰序列.结果倒置显微镜观察细菌电转效果正常.转染12 h内除siRNA1外其他3对siRNA都可以抑制ffh基因的表达,而在转染超过12 h达到24 h后,只有siRNA2可以更稳定的抑制ffh基因的表达.结论 siRNA干扰技术可以有效的沉默UA159-FR的ffh基因,siRNA2在沉默过程中效果较稳定.
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siRNA干扰对变形链球菌耐氟菌ffh基因产酸能力的影响
目的:探讨变形链球菌耐氟菌(UA159-FR) ffh基因siRNA干扰后对产酸能力的影响.方法:电穿孔法将siRNA转入UA159-FR与ffh基因序列靶向位点结合,将干扰前后细菌分别加入BHI培养液,含5％糖类的葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉中培养,pH调至7.5,24 h后测终末pH.结果:转染结果成功;干扰前后不同糖培养基中变形链球菌耐氟菌ffh基因对产酸有显著差异(P＜0.05);干扰前后在常规、葡萄糖、及乳糖中差异极显著(P＜0.01);蔗糖中差异显著(P＜0.05);淀粉中无显著差异.结论:变形链球菌耐氟菌中基因ffh对产酸能力影响显著.
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不同pH值对变异链球菌ffh基因表达的影响
目的：???检测变异链球菌（S.?mutans）ffh基因在不同pH值条件下的表达水平，分析pH值对S.?mutans?ffh基因表达的影响，分析调控ffh表达的因素。方法???在不同培养时段（4?h和18?h）和不同pH值（pH值4.0~7.0）条件下培养S.?mutans标准菌株UA159，提取样本，用荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测样本中目的基因ffh的mRNA转录水平的变化情况，分析S.?mutans?ffh基因在不同培养时段和pH值条件下的表达变化趋势。结果???培养4?h时，ffh基因相对表达量随着pH值的降低而减少，培养18?h时，ffh基因相对表达量随着pH值的降低而增加；相同pH值条件下，ffh基因相对表达量在培养4?h与18?h时的差异有统计学意义（P<0.05）。结论???S.?mutans?ffh基因的表达受细菌培养时段和pH值的影响。
关键词： 变异链球菌 ffh基因 荧光定量聚合酶链反应
