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长链非编码RNA HNF1A-AS1靶向has-miR-1对膀胱癌细胞生长和侵袭的调节作用及机制研究
目的:探究长链非编码RNA HNF1A-AS1通过靶向miR-1对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用.方法:荧光定量检测膀胱癌细胞系和正常泌尿道上皮细胞HNF1A-AS1和miR-1的表达情况;分别过表达或沉默HNF1A-AS1和miR-1,荧光定量检测miR-1的表达情况;荧光素酶报告实验确定HNF1A-AS1与miR-1的靶向关系;分别沉默HNF1A-AS1和miR-1,MTT和侵袭实验检测细胞活性和侵袭能力,免疫印迹检测细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达.结果:根据预实验结果选择253J细胞系进行后续实验.HNF1A-AS1过表达可明显抑制miR-1表达(P＜0.05),减弱miR-1 mimic对miR-1表达的促进作用(P＜0.05).沉默HNF1A-AS1可显著促进miR-1表达(P＜0.05),减弱miR-1 inhibitor对miR-1表达的抑制作用(P＜0.05);同时,HNF1A-AS1还可明显减弱带有miR-1片段野生型质粒的荧光素酶活性(P＜0.05);此外,沉默HNF1A-AS1可显著抑制膀胱癌细胞增殖及侵袭(P＜0.05),并且还能显著抑制细胞增殖相关蛋白Ki67、PCNA和侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF的表达(P＜0.05);抑制miR-1表达可明显减弱shRNA对癌细胞增殖和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论:沉默HNF1A-AS1可通过靶向上调miR-1表达减弱膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力.
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肿瘤内长链非编码RNA HNF1A-AS1的调控作用研究进展
研究发现近98％的人类基因组转录本不编码蛋白质而隶属于非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)家族,在这其中长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA)是重要的成员之一.起初LncRNA被视为转录过程中的“噪音”,随着研究的深入,发现LncRNA参与调控了人体诸多的生理病理过程.此外,在多种人体恶性肿瘤中证实LncRNA呈现异常表达并调控肿瘤的发生发展.LncRNA HNF1A-AS1在多种恶性肿瘤中呈异常高表达,并能够促进肿瘤的恶性生物学行为,全文就LncRNA HNF1A-AS1在肿瘤中的调控作用研究作一综述.
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长链非编码RNA HNF1A-AS1在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达及意义
目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) 肝细胞核因子1 alpha反义链1(hepatocyte nuclear factor 1 al-pha-antisense 1, HNF1A-AS1)在胃肠胰神经内分泌肿瘤( gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasms, GEP-NENs)中的表达及意义.方法 采用人全转录组芯片技术获得3例胃神经内分泌肿瘤( gastric neuroendocrine neoplasms, G-NENs)及其相应癌旁组织之间的多个差异表达lncRNA,并从中筛选出HNF1A-AS1作为本实验的目标lncRNA分子;采用qRT-PCR验证芯片结果的可靠性;采用质粒转染、MTT法、迁移实验检测HNF1A-AS1对GEP-NENs细胞系LCC-18和BON-1细胞增殖和迁移能力的影响;采用qRT-PCR和Western blotting分析HNF1A-AS1过表达对于GEP-NENs细胞系上皮间质转化( epithelial-mesenchymal transition, EMT)标志物表达水平的影响.结果 人全转录组芯片结果显示,HNF1A-AS1在3例G-NENs组织中的RNA表达水平均明显低于相应癌旁组织(平均差异倍数=2. 07,P<0. 05),且qRT-PCR结果与芯片结果一致,表明芯片结果真实可靠. LCC-18 和BON-1 细胞转染pcD-NA3. 1-HNF1A-AS1后均能显著上调两种细胞内部HNF1A-AS1 的RNA表达水平(P均<0. 001). LCC-18 和BON-1 细胞过表达HNF1A-AS1后,两种细胞的增殖及迁移能力明显减弱(P均<0. 05). LCC-18过表达HNF1A-AS1之后细胞内间叶细胞标志物β-catenin mRNA水平和蛋白水平明显下调,而上皮细胞标志物E-cadherin mRNA水平和蛋白水平明显升高(P均<0. 05).结论 HNF1A-AS1可能通过影响GEP-NENs细胞的增殖、迁移能力和EMT过程参与GEP-NENs的发生、发展,可能是GEP-NENs诊断新指标和潜在的治疗靶点.
关键词： 胃肠胰神经内分泌肿瘤 长链非编码RNA HNF1A-AS1
