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新生大鼠缺氧缺血性脑损伤tPA、PAI-1表达的动态变化
目的:观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中组织型纤溶酶原激活物(tPA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达变化的规律,探讨纤溶系统在缺氧缺血性脑损伤中的作用.方法:7 日龄SD新生大鼠96只,随机分为2组:缺氧缺血性脑损伤组和假手术组.两组动物模型制备成功后3、6、12、24、36、48、72、96小时断头取脑,应用免疫组织化学及原位杂交方法检测缺氧缺血性脑损伤不同时间点t-PA、PAI-1表达的变化.结果:假手术组新生大鼠各脑区均有tPA、PAI-1蛋白及mRNA的弱表达,缺氧缺血性脑损伤组不同时间点t-PA、PAI-1二者表达呈不同的动态变化:tPA蛋白及mRNA 3小时开始表达增强,主要见于皮质和海马,神经元表达明显,血管表达较弱,48小时神经元及微血管内皮表达明显增强,72小时神经元表达明显减弱,微血管内皮见有明显阳性表达,之后表达减弱,3～96 小时各时间点阳性着色神经元数目显著高于假手术组;PAI-1蛋白及mRNA 12小时表达有所增强,神经元和微血管内皮表达增多,72小时达高峰,12～96小时各时间点阳性着色神经元数目显著高于假手术组.结论:tPA和PAI-1参与HIBD的发病机制.
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针对PAI基因的小干扰RNA特异性调节PAI及tPA表达的实验研究
目的 设计针对纤溶酶原激活物抑制物(plasminogen activator inhibitor,PAI)基因的小干扰RNA(PAI siRNA),研究其对PAI和组织型纤溶酶原激活物(tPA)表达的影响.方法体外化学合成PAI siRNA,电转染法转染人主动脉平滑肌细胞(HASMC),采用RT-PCR及Western印迹法分别从mRNA和蛋白水平上检测转染细胞PAI及tPA蛋白的表达情况.结果转染细胞PAI mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显下降(P＜0.01),tPA蛋白表达较对照组明显升高(P＜0.01).结论 PAI siRNA可快速特异性封闭PAI基因表达,并调节tPA蛋白表达,使其升高,为进一步研究PAI在血栓性疾病中作用机制以及探讨PAI与tPA之间关系提供了实验基础.
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补阳还五汤对脑缺血大鼠不同时间点PAI-1、tPA、ICAM1、VCAM1表达的影响
目的 探讨补阳还五汤(BYHWT)对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠不同时间点纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、细胞间黏附分子1(ICAM1)和血管细胞黏附分子1(VCAM1)表达的影响.方法 用颈内动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,观察缺血后1、3、7d神经症状积分,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆中PAI-1、tPA的表达,Western blot法检测脑组织中ICAM1、VCAM1蛋白质表达,实时荧光定量法(RT-PCR)测定脑组织中Icam1、Vcam1 mRNA的表达.结果 补阳还五汤组神经症状积分(7 d)低于模型组和依达拉奉组(P＜0.01);补阳还五汤组大鼠血浆PAI-1表达在脑缺血后3d比依达拉奉组明显降低(P＜0.01);依达拉奉组和补阳还五汤组大鼠血浆tPA表达在缺血后3、7d比假手术组明显降低(P＜0.01);假手术组、依达拉奉组和补阳还五汤组大鼠脑组织Icam1、Vcam1 mRNA的表达在脑缺血后1、3、7d比模型组均明显降低(P＜0.01),ICAM1蛋白表达在脑缺血后3、7d比模型组明显降低(P＜0.01);补阳还五汤组大鼠脑组织VCAM1蛋白表达在脑缺血后1、3、7d比模型组明显降低(P＜0.01).结论 补阳还五汤能明显下调PAI-1、上调tPA的表达,降低黏附分子,PAI-1在治疗后3d降低明显,tPA在治疗后1d升高明显,黏附分子在治疗后7d降到低值.从而有效控制血栓的形成,抑制炎性细胞的黏附、聚集和激活,拮抗缺血性脑损伤,保护脑组织.
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缺血性脑卒中患者血纤溶活性变化规律的研究
目的研究脑梗死组和非脑梗死组患者急性期,亚急性期和恢复期组织型纤溶酶原激活物(tPA),纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的变化规律.方法 135例脑梗死组患者于发病96h内,病后14d、3月、6月、9月分别采血,77例非脑梗死组患者先采血一次,然后分别在第一次采血后14d、3月、6月、9月采血.结果脑梗死急性期tPA含量明显升高,PAI-1的含量明显升高.恢复期脑梗死即发病后3月,6月,9月tPA的含量比急性期明显降低,且脑梗死后时间越长tPA含量越低,恢复期脑梗死PAI-1的含量比急性期明显降低.结论在缺血性卒中的患者,高tPA含量提示纤溶活性的降低.高PAI-1代表纤溶抑制增强.
关键词： 脑梗死 纤溶系统 组织型纤溶酶原激活物(tPA) -
凝血、纤溶系统功能与2型糖尿病关系的研究
目的 探讨机体凝血和纤溶系统功能的改变与2型糖尿病并发症的关系.方法 选取49例2型糖尿病患者,按其24 h内尿白蛋白量分为尿白蛋白正常组21例,微白蛋白尿组15例,临床肾病组7例,另为合并急性并发症组6例.同时选择30例年龄与患者相匹配的健康者作为对照组.测定血浆组织型纤溶酶原激活物(Tpa)含量和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)含量、纤溶酶原(PLG)活性、D-二聚体(D-D)含量、凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)含量及其活性(TAFIa).结果 糖尿病(DM)患者Tpa为14.6±5.9 μg/ml和 PLG 94.4±14.3%,皆明显低于对照组(两者分别为17.9±6.0 μg/ml,101.4±11.7%;P＜0.05);DM组PAI 33.2±11.1 μg/ml、D-D 0.74±0.11 μg/ml、TAFI 122.36±47.1%及 TAFIa 77.3±8.5 μg/ml,显著高于对照组(分别是25.8±7.9、0.21±0.57、89.2±31.1、27.2±10.3),差异有显著性(均P＜0.05);分析DM肾病患者白蛋白尿正常组与对照组差异无显著性,其余4组与对照组差异均有显著性(P＜0.05).对TAFI相关分析,表明其与患者UAE、PAI、D-D结果呈正相关.结论 机体凝血纤溶功能的异常改变与2型糖尿病肾病关系密切,各项目的检验,可反映糖尿病微血管病的程度,从而有助于临床对患者病情与预后的评估.
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抗组织型纤溶酶原激活物单克隆抗体的制备及其特性鉴定和初步应用
目的研制抗组织型纤溶酶原激活物(tPA)单克隆抗体(mAb), 鉴定其各种生物学特性.方法采用传统的细胞融合、有限稀释法,制备稳定分泌mAb的细胞株.采用辛酸、硫酸铵沉淀法,纯化腹水中的mAb,以SDS-PAGE鉴定其纯度.运用ELISA和细胞免疫组化染色,鉴定mAb的各项特性.结果获得了两株能稳定分泌抗tPAmAb的细胞株.用该两株细胞分泌的mAb能检测出0.4 μg/L重组的tPA和血清中的tPA.结论成功地研制了两株抗tPA的mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件.
关键词： 杂交瘤 单克隆抗体 组织型纤溶酶原激活物(tPA) 特性鉴定
