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IRAK-MmRNA在急性脑出血大鼠肝Kupffer细胞中的表达及涤痰通瘀方的干预作用
目的 研究急性脑出血大鼠肝Kupffr细胞(KCs)中白细胞介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)的表达变化及涤痰通瘀方对急性脑出血大鼠肝损害的保护作用.方法 将健康SD大鼠随机分为正常组、急性脑出血模型组和涤痰通瘀方组(酒大黄、胆南星、石菖蒲、蒲黄、三七、水蛭),尾状核注射VⅦ型胶原酶法建立大鼠急性脑出血模型,按10 mL/kg灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,上、下午各1次,连续4d,第4天末次给药40min后腹主动脉取血,分离血清,-20℃冻存备用.密度梯度离心法提取正常大鼠肝KCs,分别给药体外培养6、12、24h后收集标本,实时荧光定量(PCR)检测各时相点IRAK-4 mRNA表达.结果 脑出血模型组在各时间点IRAK-M mRNA表达水平[(0.749±0.045)、(0.641±0.054)、(0.728±0.056)]较正常组[(1.108±0.066)、(0.865±0.038)、(0.758±0.041)]均明显降低(P＜0.05);中药治疗组的IRAK-M mRNA表达水平[(0.902±0.062)、(0.780±0.033)、(0.896±0.046)]较脑出血模型组明显升高(P＜ 0.05).结论 涤痰通瘀方可以提高KCs内IRAK-M mRNA的表达,对急性脑出血应激性肝损害具有一定的保护作用.
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涤痰通瘀方干预急性脑出血大鼠肝组织IRAK-M表达变化的影响
目的 研究急性脑出血大鼠肝组织中IRAK-M表达的变化,并探讨涤痰通瘀方剂对急性脑出血大鼠肝损害的干预作用.方法 通过建立SD大鼠急性脑出血模型,并随机分为中药组(酒大黄、胆南星、石菖蒲、蒲黄、三七、水蛭)、脑出血组、假手术组、正常组,每组分为24、48、72 h3个时间亚组,检测每组肝脏组织IRAK-M蛋白表达水平及肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并观察肝组织HE染色结果.结果 脑出血模型组在造模后各个时间点IRAK-M蛋白表达水平较假手术组及正常组均明显降低(P＜0.05);中药治疗组的IRAK-M蛋白表达水平较脑出血模型组明显升高(P＜0.05),与假手术组、正常组相比略有降低;中药治疗组及脑出血模型组肝脏IRAK-M蛋白表达水平与组织TNF-α水平呈负相关.结论 IRAK-M蛋白表达水平升高可能是抑制脑出血后诱发的LPS胞内信号转导炎性级联反应的重要因素;涤痰通瘀方剂可加强IRAK-M激酶活性,从而抑制炎症因子的释放,减轻急性脑出血大鼠肝脏损伤的程度.
关键词： 白细胞介素-1受体相关激酶-M 急性脑出血 肝损害 涤痰通瘀法 肿瘤坏死因子-α -
白介素-1受体相关激酶-M在系统性红斑狼疮患者单核细胞中的表达及与临床的相关性
目的：：研究白介素-1受体相关激酶-M( Interleukin-1 receptor associated kinases M,IRAK-M)在系统性红斑狼疮( Systemic lupus erythematosus,SLE)患者单核细胞中的表达情况及与临床的相关性。方法：采用实时荧光定量PCR技术,检测SLE组和健康对照组单核细胞中IRAK-M的mRNA表达量；采用酶联免疫吸附试验法检测抗双链DNA抗体( dsDNA)和抗单链DNA抗体(ssDNA)；采用动态免疫散射比浊法测定补体3(C3)、补体4(C4)和C-反应蛋白(CRP)；采用魏氏法测定红细胞沉降率( ESR)。同时,使用Pearson或Spearman分析IRAK-M与SLEDAI评分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性。结果：①SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于健康对照组(P<0.05),活动期SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于稳定期SLE组(P<0.05)。②SLE组dsDNA、ssDNA、CRP和ESR水平明显高于健康对照组(P<0.05),C3和C4水平明显低于健康对照组(P<0.05)；而且,活动期SLE组dsDNA、ssDNA、CRP和ESR水平明显高于稳定期SLE组(P<0.05),C3和C4水平明显低于稳定期SLE组( P<0.05)。③相关分析显示：IRAK-M 的 mRNA表达量与 C3成正相关( P<0.05),与 SLEDAI评分、dsDNA、CRP、ESR呈负相关(P<0.05),与ssDNA和C4无相关性(P>0.05)。结论：IRAK-M在SLE发病机制中起着重要的作用；定量检测IRAK-M的mRNA表达量可监测SLE疾病活动度和判断预后。同时,对SLE患者dsDNA、ssDNA、CRP、C3、C4和ESR水平的常规检测和定期监测是非常必要的。
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白藜芦醇对人白细胞介素-1受体相关激酶-M基因表达的抑制作用及其机制
目的 探讨白藜芦醇对人白细胞介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)基因表达的抑制作用及其分子机制.方法 用不同浓度的白藜芦醇分别作用于转染神经前体细胞表达发育调控样蛋白4(Nedd4L)-HA或IRAK-M-Flag质粒的Hela细胞和人单核细胞株THP1细胞,处理20 h后采用Western印迹法检测其Nedd4L和IRAK-M的表达.在A549和Hela细胞中分别共转染IRAK-M-Flag和不同浓度的Nedd4L-HA表达质粒,36 h后采用Western印迹法检测IRAK-M和Nedd4L的表达.用IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表达质粒分别单独转染、共同转染至Hela细胞,36 h后用细胞裂解液处理细胞,采用免疫共沉淀法检测IRAK-M与Nedd4L的相互作用.在A549细胞中分别共转染IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表达质粒,36 h后采用免疫荧光法检测IRAK-M和Nedd4L的共定位情况.结果 Hela细胞中分别转染2μg外源Nedd4L-HA或IRAK-M-Flag质粒24 h后,0、10、20 μmol/L白藜芦醇处理20 h,Western印迹法检测结果显示,10、20 μmol/L白藜芦醇处理组的Nedd4L-HA蛋白质相对表达量均显著高于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均＜0.01),而10、20 μmol/L白藜芦醇处理组IRAK-M-Flag蛋白质相对表达量均显著低于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均＜0.05),且20 μmol/L白藜芦醇处理组显著低于10 μmol/L白藜芦醇处理组(P＜0.01).0、10、20 μmol/L白藜芦醇处理THP1细胞20 h,Western印迹法检测结果显示,10、20 μmol/L白藜芦醇处理组的Nedd4L蛋白质相对表达量均显著高于0 μmol/L白藜芦醇处理组(P值均＜0.01),而IRAK-M蛋白质相对表达量均显著低于0μmol/L白藜芦醇处理组(P值均＜0.05).在A549和Hela细胞中分别转染1 μg的IRAK-M-Flag和不同质量(0、0.5、1μg)的Nedd4L-HA表达质粒,Western印迹法结果显示,在A549细胞中,0.5、1 μg Nedd4L-HA转染组的IRAK-M-Flag蛋白质相对表达量均显著低于0 μg Nedd4L-HA转染组(P值均＜0.01);在Hela细胞中,0.5、1 μg Nedd4L-HA转染组的IRAK-M-Flag蛋白质相对表达量均显著低于0μg Nedd4L-HA转染组(P值均＜0.01).用IRAK-M-Flag、Nedd4L-HA表达质粒分别单独转染、共同转染至Hela细胞中,免疫共沉淀检测结果显示,在共表达IRAK-M和Nedd4L的细胞裂解物中,用抗Flag的抗体能将Nedd4L-HA沉淀下来,用抗HA的抗体同样能将IRAK-M-Flag沉淀下来.将表达质粒IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA共同转染至A549细胞中,36 h后免疫荧光检测结果显示,在共转染的细胞中,可观察到绿色荧光和红色荧光以重叠形式分布于细胞膜和细胞质中.结论 白藜芦醇可抑制IRAK-M蛋白的表达,其作用机制可能与Nedd4L蛋白的表达上调有关.
