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镇痛抗肿瘤缬精甘肽BmK AGAP的两对二硫键C16-C36和C22-C46对镇痛活性的影响
目的 研究二硫键C16-C36和C22-C46对镇痛抗肿瘤缬精甘肽BmK AGAP镇痛活性的影响.方法 使用本实验室已构建成功的2个二硫键双突变体(C16S,C36S)和(C22S,C46S),在大肠杆菌中诱导表达,通过金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法对突变体蛋白分离纯化,采用小鼠醋酸扭体法测定2个突变体的镇痛活性,圆二色谱分析BmK AGAP和2个二硫键突变体的二级结构变化差异,利用生物信息学的方法模建BmK AGAP的三维空间结构.结果 a.目的蛋白在大肠杆菌BL21 (DE3)中实现了可溶性表达；b.采用金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法获得了电泳纯样品；c.2个双突变体(C16S,C36S)和(C22S,C46S)的镇痛活性与阳性对照组rBmK AGAP比较均下调,具有显著性差异.结论 二硫键C16-C36和C22-C46在保持和调节BmK AGAP的镇痛生物活性方面具有重要作用.
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两种具有双功能活性蝎毒蛋白融合体的构建
目的 首次报道利用东亚钳蝎镇痛抗肿瘤缬精甘肽-BmKAGAP产生两种不同的融合蛋白,目的是获得镇痛和抗肿瘤的双功能活性.方法 融合蛋白是以嵌合毒素的形式进行构建,由三部分组成,包括促性腺激素释放激素(luteinizing hormone-releasing hormoneL,HRH),两种不同类型的柔性连接物,以及BmKAGAP.克隆编码两种融合蛋白的基因并在大肠杆菌中实现可溶性表达.通过金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法对融合蛋白分离纯化,采用小鼠醋酸扭体法和MTT法测定融合蛋白的镇痛活性与细胞抑制活性.结果 融合蛋白在小鼠模型中体现出镇痛活性(rLHRH-Tag(His)-AGAP＞rTag(His)-LHRH-L8-AGAP＞rBmKAGAP),同时对肝癌细胞株Hep3B具有细胞毒活性(rLHRH-Tag(His)-AGAP＞rBmKAGAP＞rTag(His)-LHRH-L8-AGAP).结论 得到优化的双功能融合蛋白候选者为嵌合毒素rLHRH-Tag(His)-AGAP.
