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窖蛋白1在无血清状态下诱导FBJ细胞死亡
目的 研究无血清状态下,FBJ-S1细胞较FBJ-LL细胞更易死亡的原因.方法 用细胞活性检测法分析细胞的活性,分别用HPTLC法、逆转录PCR法和免疫印迹法检测细胞中GD1a和窖蛋白1(caveolin-1)的含量.结果 研究表明,在无血清培养基培养条件下,富含神经节苷脂GM3和GD1a的低转移性的FBJ-S1小鼠骨肉瘤细胞趋向死亡,但对含有几乎相同量GM3而无GD1a表达的高转移性的FBJ-LL细胞的生长却未见明显影响.同时发现:a.FBJ-S1细胞富含窖蛋白1,而FBJ-LL细胞中窖蛋白1表达量则较低.b.利用小干扰基因沉默技术在FBJ-S1细咆中沉默窖蛋白1的表达,结果使细胞存活率升高;c.使用GD1a处理FBJ-LL细胞导致其趋向死亡,通过免疫印迹法检测窖蛋白1发现其蛋白表达量增加.结论 在无血清培养条件下,窖蛋白1诱导FBJ细胞的死亡.
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细胞质唾液酸酶(Neu2)通过Cdk2通路抑制FBJ-LL细胞生长
目的 研究细胞质唾液酸酶(neuraminidase 2,Neu2)调控FBJ-LL细胞生长的作用机制.方法 利用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内Neu2及周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,Cdk2)的mRNA表达水平,采用酶活性检测法检测细胞内总唾液酸酶的活性,细胞活性法检测细胞的生长情况,碘化丙啶染色法辅助流式细胞仪分析处于不同细胞周期的DNA含量分布.结果 Neu2 sense cDNA转染的FBJ-LL细胞中Neu2 mRNA的表达显著升高,其总唾液酸酶的活性也随之升高.FBJ病毒诱导的小鼠骨肉瘤(FBJ-LL)细胞中Neu2的过量表达可以抑制该细胞的生长,升高该细胞中处于细胞周期G1期细胞的相对数量,同时抑制了该细胞中的Cdk2的mRNA表达水平.结论 Neu2通过抑制细胞周期分子Cdk2的表达来阻碍FBJ-LL细胞DNA合成,从而实现对FBJ-LL细胞的生长抑制.
关键词： 细胞质唾液酸酶2 周期蛋白依赖性激酶2 FBJ细胞 细胞生长抑制 细胞周期G1 -
在无血清条件下TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路对FBJ细胞生长的调控作用
目的 研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor OL,TNFα)在无血清条件下作为生长因子促进FBJ细胞生长的信号通路.方法 用细胞活性检测法分析细胞的活性;分别用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和免疫印迹法检测细胞中TNFα的表达以及胞外信号调节激酶(extracdlular signal-regulated kinase,Erk)、p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化水平.结果 在无血清培养基培养条件下,经TNFα(10 μg·L-1)处理的FBJ细胞明显对抗无血清条件下诱发的细胞死亡,TNFαsensc cDNA转染的FBJ-LL和FBJ-S1细胞均能提高其在正常培养基以及无血清培养基中的生长速度,TNFα是FBJ细胞中重要的生长因子之一;蛋白酶N1(protein kinase N1,Pkn1)siRNA可明显沉默目的 基因Pkn1的表达,同时降低TNFα的含量;Pkn1沉默的细胞在无血清条件下的生长明显被抑制;TNFα处理的细胞能迅速刺激Erk的磷酸化,Erk沉默的FBJ-LL细胞的生长速度明显降低,TNFα通过Erk信号通路诱发细胞生长;TNFα亦能诱导另一有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族p38的磷酸化;神经节苷脂GD1a可降低TNFα在FBJ细胞中的表达,TNFα诱发的无血清条件下的生长速度也被神经节苷脂GD1a抑制.结论 在无血清条件下.TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路调控小鼠骨肉瘤FBJ细胞的生长.
