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基于HLA组特异性单倍体全长测序方法对模棱两可结果的准确定型
背景:传统的HLA测序分型技术都是对父系母系双倍体进行扩增,由于HLA多样性高,产生了大量的模棱两可难题,而采用基于组特异性单倍体全长测序分型方法来解决模棱两可结果的确认定型鲜有报道.目的:分析基于组特异性单倍体全长测序分型方法对HLA基因分型模棱两可结果准确定型的效果.方法:对2例模棱两可结果标本以低分辨率分型方法结果作为参考起点,通过组特异性扩增分离,基于等位基因全长单倍体的Sanger测序(PCR-SBT)分型.结果与结论:①2例模棱两可分型结果分别为A*02:03:01及C*07:02:01:01杂合新等位基因;②A*02:03:01杂合新等位基因与A*11:01:01:01全长比较,在NT817由C发生突变为T;③C*07:02:01:01杂合新等位基因与C*08:01:01比较,在NT879由A发生突变为G;④结果表明,以低分辨率分型方法结果作为参考起点,通过组特异性扩增分离,基于组特异性单倍体全长测序分型方法能准确定型HLA基因分型模棱两可结果并发现新等位基因.
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PCR-SBT法HLA基因分型模棱两可结果的判读及解决对策
目的 研究PCR-SBT法HLA基因分型结果判读中出现的模棱两可问题并提出解决策略.方法 对306名随机抽取的组织配型患者的DNA采用PCR-序列特异性引物(Sequence Specific Primer,SSP)低分辨方法检测,同时采用PCR-SBT法进行HLA-A,B,DRB1高分辨基因分型.PCR-SBT法模棱两可结果用PCR-SSP高分辨方法复核确认.结果 所有306例检测标本的高低分辨血清学抗原一致,经PCR-SBT基因测序方法检测有111份模棱两可结果,占36.3%(111/306).其中HLA-A座位有30对等位基因存在模棱两可结果,占所有检测标本等位基因总数的3.3%;HLA-B座位有66对,占7.2%;HLA-DRB1座位有 36对,占3.9%.所有模棱两可标本经PCR-SSP HLA基因高分辨分型试剂PCR-SSP等方法复核确认.结论针对PCR-SBT法进行HLA-A,B,DRB1高分辨基因分型模棱两可结果所建立的解决策略,对于提高HLA数据分型的速度和分型准确性有重要意义.
关键词： 人类白细胞抗原 PCR-SBT基因测序方法 模棱两可结果
