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抑制GATA5蛋白可否促进HELA细胞中癌干细胞因子sox2、c-myc及CD44的表达
背景:GATA5蛋白在多种癌症发生过程中被抑制表达,有研究显示GATA5降低表达或被甲基化后失去功能,不能有效促进干细胞分化,维持细胞的正常功能.宫颈癌HELA细胞表达GATA5蛋白,在宫颈癌中抑制GATA5表达是否可促进其恶性转化还是未知.目的:分析GATA5蛋白在宫颈癌HELA细胞中被进一步抑制表达后,其恶性转化情况及与癌干细胞形成相关因子sox2,c-myc及CD44的表达情况.方法:转入CMV-siRNA-gata5,使GATA5在HELA细胞中被进一步抑制表达后, ①RT-PCR检测c-mycmRNA,sox2 mRNA的表达;②MTT法检测HELA细胞的增殖能力;③检测HELA细胞的集落形成和软琼脂单克隆形成能力;④Western blot检测细胞GATA5、c-myc、sox2蛋白表达变化;⑤激光共聚焦检测细胞的CD44蛋白定位及蛋白表达变化.结果与结论:用CMV-siRNA-gata5抑制HELA细胞中的GATA5表达后,HELA细胞的增殖能力、单克隆形成及集落形成能力均增强;同时发现其癌干细胞因子c-myc,sox2,CD44的表达增强.提示GATA5蛋白被抑制表达后,HELA细胞的恶行性为增加,其机制可能是GATA5被抑制后,促进了癌干细胞因子sox2,c-myc,CD44等的表达.
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特发性房颤相关GATA5基因新突变的识别
目的:识别特发性房颤(AF)相关GATA5基因新突变. 方法:收集120例无血缘关系的特发性AF患者和200名无血缘关系且种族匹配的健康对照者的临床资料和血标本.抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增AF候选基因GATA5的全部外显子及其两侧的部分内含子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序.将所测的序列与GenBank数据库中的GATA5基因序列进行比对,以发现GATA5基因突变.应用多序列比对软件ClustalW评估突变氨基酸的保守性,应用致病性预测软件MutationTaster预测突变的致病性. 结果:在2例AF患者各发现1个新的GATA5基因杂合错义突变,突变率约为1.67％.突变分别为GATA5基因编码核苷酸序列第668位的腺嘌呤(adenine,A)变为胸腺嘧啶(thymine,T),即c.668A＞T突变；第863位的A变为胞嘧啶(cytosine,C),即c.863A＞C突变.多序列比对显示2种突变氨基酸在进化上均高度保守,致病性预测表明2种突变均有致病性. 结论:本研究识别出AF相关GATA5基因新突变,有助于揭示AF发生的分子机制.
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先天性心脏病相关GATA5基因突变研究
目的:识别先天性心脏病(CHD)相关GATA5基因新突变. 方法:收集100例无血缘关系的CHD患者和200名无血缘关系且种族匹配的健康对照者的临床资料和血标本.抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增GATA5基因的编码外显子及其剪接位点,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序.将所测的序列与GenBank数据库中的GATA5基因序列进行比对以发现GATA5基因突变.应用多序列比对软件ClustalW评估突变氨基酸的保守性,应用致病性预测软件MutationTaster预测突变的致病性. 结果:在2例CHD患者各发现1个新的GATA5基因杂合错义突变,突变率为2％.其中1个是GATA5基因编码核苷酸序列第395位的鸟嘌呤(guanine,G)变为胸腺嘧啶(thymine,T),即c.395G＞T突变;另一个是GATA5基因编码核苷酸序列第991位的胞嘧啶(cytosine,C)变为腺嘌呤(adenine,A),即c.991C＞A突变.多序列比对显示2种突变氨基酸在进化上均高度保守.致病性预测显示2种突变均有致病性. 结论:本研究发现了CHD相关GATA5基因新突变,有助于揭示CHD新的分子机制.
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GATA5甲基化在结直肠癌血浆和粪便中的检测及临床诊断价值
背景与目的：结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是全球发病率第三，死亡率第四的恶性肿瘤。遗传学及表观遗传学的改变引发抑癌基因甲基化表达沉默是CRC发生的重要原因，本研究旨在探讨血浆、粪便GATA5启动子甲基化检测在CRC临床诊断中的应用价值。方法：收集34例健康体检者和43例CRC患者的血浆和配对的粪便标本。采用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR method，MSP)检测其血浆、粪便中GATA5甲基化水平，并分析其与临床病理特征相关性。结果：MSP结果显示CRC患者血浆、粪便中GATA5启动子甲基化率(60.74%、76.60%)高于健康者发生率(26.47%、32.35%)，差异均有统计学意义(P值分别为0.0067，0.0002)。CRC患者血浆甲基化发生率与临床分期(P=0.0005)、淋巴结转移(P=0.020)密切相关，而粪便GATA5甲基化水平与临床病理特征无统计学意义。结论：检测粪便GATA5甲基化水平并辅以血浆GATA5甲基化水平可作为一种简单、非侵入、敏感及特异的方法应用于CRC患者的临床诊断。
