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过表达miR-32削弱多氯联苯抑制P19细胞向心肌细胞的分化
背景：多氯联苯对P19细胞分化成心肌细胞有抑制作用。miRNAs在多氯联苯抑制P19细胞分化成心肌细胞过程中发挥了重要的作用。
目的：探索miR-32在调节多氯联苯对P19细胞分化成心肌细胞中的作用。
方法：将P19细胞与1%二甲基亚砜和2.5μmol/L多氯联苯共孵育，通过Western blot鉴定分化标志物α-actinin、desmin、cTnI以及早期心脏发育的重要转录因子GATA4的变化。qRT-PCR鉴定多氯联苯对miR-32表达的影响。应用基因重组技术成功构建了小鼠miR-32真核表达载体，将其转染至P19细胞，与2.5μmol/L多氯联苯和1%二甲基亚砜共孵育，通过Western blot实验观察分化相关蛋白表达。
结果与结论：①多氯联苯降低了 miR-32的表达水平，抑制 P19细胞向心肌细胞的分化；②成功构建了小鼠miR-32真核表达载体，建立了稳定过表达miR-32的P19细胞系；③过表达miR-32发挥了削弱多氯联苯对P19细胞向心肌细胞分化的抑制作用。 -
多发性骨髓瘤患者 miR-21和 miR-32的表达及临床应用
目的：探讨 microRNA-21（miR-21）和 microRNA-32（miR-32）在多发性骨髓瘤（MM）骨髓单个核细胞中的表达水平及意义。方法选取2010年1月至2014年1月在我院血液科及骨科就诊的多发性骨髓瘤患者46例和正常对照的骨髓标本30例作为研究对象，患者均符合多发性骨髓瘤的诊断标准，采用实时荧光定量 PCR 法检测骨髓单个核细胞中 miR-21和 miR-32的表达水平。结果 miR-21和 miR-32在 MM 中的表达水平明显高于正常对照组，难治组 miR-21和 miR-32表达水平明显高于初治组，差异均有统计学意义（P ＜0．05）。治疗缓解组 miR-21和 mR-32的表达水平低于初治组，差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论 miR-21和 miR-32的表达可以对 MM 患者疾病进展和预后进行预测。
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miR-32在非小细胞肺癌中的表达
目的:基于芯片数据库分析的基础上,探讨miR-32在非小细胞肺癌患者中的表达水平.方法:在GEO和ArrayExpression数据库中搜索关键词"microRNA和肺癌"检索出两个样本量大的芯片数据,分别是GEO数据库中编码为GSE61741和ArrayExpression数据库中编码为E-TABM-22的芯片数据,对两组数据进行分析找出有差异的microRNA.另外收集2010.02-2012.09期间在吉林大学附属中日联谊医院胸外科进行肺癌手术切除的32名患者的肺癌组织及配对的癌旁正常肺组织标本,检测标本中miR-32的表达水平.结果:综合分析GSE61741和E-TABM-22的芯片数据发现有共同差异的microRNA共有8个,其中上调的有2个,分别是hsa-miR-192与hsa-miR-197,下调的有6个,分别是hsa-miR-126、hsa-miR-199b-3p、hsa-miR-219-1-3p、hsa-miR-26a、hsa-miR-32与hsa-miR-9.为了进一步探讨miR-32在癌症中的作用,我们对GSE61741中其他癌症患者及健康者血浆中miR-32的芯片数据进行分析,发现miR-32在结肠癌、神经胶质瘤、肾癌、前列腺癌、Wilm's瘤中的表达水平均显著低于健康者(P＜0.01).对32例及E-TABM-22芯片数据中65例NSCLC患者癌及配对的癌旁正常肺组织中miR-32的表达水平分析发现癌组织中miR-32的表达水平显著下调(P＜0.001).结论:miR-32在非小细胞肺癌组织中低表达,提示miR-32可能为新的NSCLC诊断标记分子.
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miRNA-32通过下调PTEN表达促进食管癌细胞的增殖
目的 通过检测miR-32在食管癌组织和食管癌细胞系中的表达,探讨miR-32对食管癌增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测47例食管癌组织和7种食管癌细胞系中miR-32表达水平;生物信息学预测miR-32下游靶基因磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homologue,PTEN),并通过荧光素酶报告基因法验证其结合状态;通过miR-32 mimics来研究其对PTEN的mRNA和蛋白表达的影响及其对食管癌细胞系KYSE-410增殖和凋亡的影响;通过PTEN回补实验进一步验证miR-32对其的作用.结果 89％(42/47)的食管癌肿瘤组织中miR-32表达明显上调,在低分化的食管癌细胞系KYSE-410中表达程度高(P＜0.05);生物信息学预测miR-32可靶向作用于PTEN,高表达miR-32可明显抑制PTEN 3'UTR荧光素酶活性(P＜0.05);高表达miR-32可明显促进KYSE-410增殖,并抑制其凋亡,抑制率28％(P＜0.05);高表达miR-32对PTEN mRNA表达无明显影响(P＞0.05),但可明显抑制其蛋白表达,抑制率48％(P＜0.05);相较于miR-32单独处理组,PTEN补救实验可部分恢复PTEN蛋白的表达,同时也可逆转其对凋亡的抑制作用,此外,在96 h组可明显抑制食管癌细胞增殖(P＜0.05),在其他时间点与miR-32组无明显差异(P＞0.05).结论 miR-32可通过下调PETN的表达促进食管癌细胞的增殖.
关键词： 食管癌 miR-32 磷酸酶-张力蛋白基因 增殖
