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骨形态发生蛋白9诱导骨骼肌源性干细胞的成骨分化
背景:已有实验报道部分骨形态发生蛋白能够诱导间充质干细胞等向成骨细胞的分化.目的:评估骨形态发生蛋白9定向诱导骨骼肌源性干细胞成骨分化的能力.方法:采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法提取兔骨骼肌源性干细胞,用重组腺病毒的方法将骨形态发生蛋白9导入细胞,通过碱性磷酸酶定量测定、钙盐沉积实验观察骨形态发生蛋白9对于骨骼肌源性干细胞成骨分化的定向诱导作用.结果与结论:成功分离培养兔骨骼肌源性干细胞,免疫细胞化学染色80%以上的细胞呈Sca-1 阳性.骨形态发生蛋白9能诱导骨骼肌源性干细胞碱性磷酸酶的表达,且能够促进细胞的钙盐沉积.提示,骨形态发生蛋白9具有定向诱导骨骼肌源性干细胞分化成骨的能力.
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生长因子对新生小鼠肌源性干细胞增殖的影响
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)单独及联合作用对骨骼肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSCs)生长的影响.方法 采用连续预贴壁法从新生小鼠后肢肌分离培养MDSCs,免疫细胞化学染色法检测干细胞标志Sca-1和CD34的表达,HE染色观察细胞肌管形成,MTT比色法检测bFGF和EGF对MDSCs增殖的影响,并分析bFGF和EGF效应与培养时间以及与bFGF、EGF浓度之间的关系.结果 从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs,Sca-1阳性占细胞总数90%以上,HE染色未见明显肌管形成.bFGF、EGF对MDSCs的促增殖作用随浓度的增加而增加,并逐渐趋于饱和.与阴性对照组比较,bFGF于3天、EGF于4天表现出明显促增殖效应(P<0.01),而二者联合作用于1天即表现出明显促增殖效应(P<0.01).结论 bFGF和EGF都具有促MDSCs增殖的作用,两者联合作用促增殖效果更快、更强.
关键词： 新生小鼠 骨骼肌源性干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 表皮生长因子 -
成年大鼠骨骼肌肌源性干细胞向神经细胞的分化
目的 研究成体骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向神经细胞分化的潜能.方法 从成年 SD 大鼠骨骼肌组织中培养出肌源性干细胞,采用 bFGF、EGF 诱导出神经球样细胞团,并检测 nestin 表达.再在贴壁培养条件下,用 RA、BDGF 诱导分化,并检测 NSE、GFAP 的表达.结果 MDSCs 能被诱导出神经球样细胞团,并表达 nestin.这些细胞进一步诱导,部分细胞表现出神经元样或胶质细胞样形态,并表达 NSE 或 GFAP.结论 MDSCs 能向神经细胞样细胞分化,有望用于神经系统疾病的治疗.
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自体骨骼肌源性干细胞心肌内移植治疗缺血性心脏病研究进展
急性心肌梗死(AMI)是严重威胁人类生命健康的常见病和多发病.寻找确实有效治疗急性心肌梗死的方法一直是人们追求的目标.20世纪70年代末,Bader等证实受损的蝾螈心脏可以由绞碎的心肌碎片修补以来,利用成肌细胞及骨骼肌干细胞移植治疗心脏疾病的方法逐渐被重视起来.这种细胞移植方法,可以外源性补充潜在的心肌前体细胞,改善心脏血流动力学状况,减少坏死心肌面积,促进心脏恢复与重建,逐渐成为治疗心脏疾病特别是缺血性心脏病的手段之一.
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碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对骨骼肌源性干细胞的促增殖效应
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)单独及联合应用对骨骼肌源性干细胞(muscle derived stem cells, MDSCs)生长的影响. 方法 取出生24 h内的昆明小鼠15只,采用连续预贴壁法从小鼠后肢肌分离培养MDSCs,用含2%胎牛血清的DMEM培养基促进其向骨骼肌细胞分化.取原代MDSCs及MDSCs分化细胞,采用免疫细胞化学染色检测干细胞标志Sca-1和骨骼肌细胞标志α-Sarcomeric肌动蛋白的表达.HE染色观察细胞肌管形成.MTT比色法检测不同浓度(6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 ng/ml)的bFGF和EGF单独应用96 h对MDSCs增殖的影响以及二者(100.00 ng/ml)联合作用24 、48 、72 和96 h对MDSCs增殖的影响. 结果 从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs,免疫细胞化学染色90%以上的MDSCs呈Sca-1阳性,分化形成的肌管呈α-Sarcomeric肌动蛋白阳性.HE染色可见肌管形成.bFGF、EGF对MDSCs的促增殖效应随浓度的增加而增加.与阴性对照组比较,bFGF于12.50 ng/ml出现促增殖效应(P＜0.05);25.00 ng/ml组与12.50 ng/ml组比较,作用提高(P＜0.01);50.00、100.00 ng/ml组较25.00 ng/ml组无明显提升(P＞0.05);EGF的作用与bFGF类似,但于50.00 ng/ml时趋于饱和.与阴性对照组比较,EGF于72 h、bFGF于96 h表现促增殖效应(P＜0.01),而二者联合应用于24 h即表现促增殖效应(P＜0.01),并于48、72和96 h增殖效应均较单独应用显著提高(P＜0.05). 结论 bFGF和EGF都能促进MDSCs的增殖,联合作用更快、更强.
关键词： 骨骼肌源性干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 表皮生长因子 培养
