您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
组织-亡程文献资料
-
自组装短肽水凝胶体外三维培养兔关节软骨细胞
背景:自组装短肽是人工设计合成的一类新型纳米生物材料,与软骨细胞复合培养后如能促进细胞基质的分泌,细胞分裂增殖及细胞表型的维持,将有可能成为一种较理想的细胞支架应用在软骨组织工程中.目的:观察兔关节软骨细胞在纳米自组装短肽KLD-12水凝胶中三维培养的生物学特性.设计、时间及地点:观察性实验.于2007-11/2008-04在四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所实验室完成.材料:纳米短肽KLD-12序列为:9782Ac-KIDLKLDLKLDL-CONH2,由上海波泰生物公司合成.方法:取新西兰兔关节软骨,通过酶消化法获取软骨细胞,体外培养2代后以5×109L-1的密度接种于4 g/L的自组装短肽KLD-12溶液中.用磷酸盐缓冲液诱导成胶后进行三维培养.主要观察指标:①通过倒置相差显微镜观察软骨细胞在纳米短肽水凝胶中的形态.②用甲苯胺蓝染色,免疫组化检测细胞外基质分泌情况.③反转录一聚合酶链反应检测软骨细胞黏多糖、前Ⅱ型胶原、前Ⅰ型胶原基因的表达情况.结果:①兔关节软骨消化分离的软骨细胞成活率达95%以上.②软骨细胞在纳米短肽水凝胶中体外培养时,细胞生长旺盛、增殖活跃.细胞为圆形聚集成团状或岛状,细胞团周围有类似的软骨陷窝形成.③甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化均呈阳性,细胞基质中黏多糖、Ⅱ型胶原含量随培养时间延长逐渐增加.④反转录-聚合酶链反应结果显示软骨细胞在纳米短肽水凝胶经过3周体外培养一直保持了分泌黏多糖及表达Ⅱ型胶原的能力.结论:自组装短肽KLD-12三维水凝胶能较好维持软骨细胞正常形态、功能和增殖能力.
