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大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1 α的变化
背景:研究发现,低氧诱导因子1α不仅与缺氧的生理反应有关,而且还参与了正常的胚胎发育过程.目的:观察大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1 α的变化.设计、时间及地点;随机对照动物实验,于2007-01/09在青岛大学医学院山东省分子病毒重点实验室完成.材料:成年未经产清洁型Wistar大鼠,体质量200-250g.方法;雌鼠和雄鼠1:1合笼,制成孕鼠.分别于孕12,16,20d时剖腹取胎,获得各阶段的鼠胚.出生后大鼠按日龄分别于1,5,10d和12个月龄麻醉处死后摘除眼球,分离视网膜及制作石蜡切片.主要观察指标:免疫组织化学方法、半定量反转录-聚合酶链反应检测大鼠视网膜在胚胎发育过程中各时间段低氧诱导因子1α蛋白及低氧诱导因子1α mRNA的表达.结果:胚胎期视网膜神经上皮层及色素上皮层均有低氧诱导因子1 α阳性表达,生后发育早期视网膜神经上皮层及色素上皮层也可见低氧诱导因子1 α阳性表达,以神经节细胞、内网层更明显,随着发育进展.其阳性表达主要位于视网膜节细胞层.大鼠视网膜低氧诱导因子1 α蛋白及mRNA的表达为胚胎期高、生后发育期逐渐下降、成年期低,3期之间相比,差异有显著性意义(P<0.01).结论:大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1 α随着发育的进展逐渐降低,并逐渐集中表达于视网膜节细胞层.
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低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响
将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的入近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响.方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育.电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化；原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数；Western blot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化.结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高；其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显.(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P＜0.05)；细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显.(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高；培养液中HO-1、VEGF含量增高(P＜0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显.结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1 α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关.
