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痿症方联合嗅鞘细胞移植对脊髓慢性压迫损伤后神经营养素3表达的影响
背景:中药痉证方、痿证方具有促进神经营养因子分泌的作用已经诸多实验结果证实,而脊髓功能恢复与神经营养素3的表达与分泌有密切的关系.目的:实验拟观察痿症方联合嗅鞘细胞移植对脊髓慢性压迫损伤后神经营养素3的影响.设计、时间及地点:对照动物实验,细胞学观察,于2005一11/2007 03在上海中医药大学脊柱病研究所完成.材料:新生SD雄性大鼠10g采用酶消化法培养嗅鞘细胞.3月龄雄性SD大鼠以螺钉持续性压迫大鼠C4脊髓的方法建立脊髓慢性压迫动物模型.痿症方由上海中医药大学脊柱病研究所提供,成分为炙黄芪、党参、炒白术、当归.方法:造模1个月后分为:模型组,后路椎板减压,继续喂养2个月:DF12培养液组:注入等剂量DMEM/Ham's F-12培养基,继续喂养2个月.嗅鞘细胞组:嗅鞘细胞移植,按1μL/点在距离脊髓压迫区域上下0.5 mm处取4点注射109 L-1嗅鞘细胞,注入速度为1μ L/min,继续喂养2个月.含药血清培养嗅鞘细胞组:进行经症方含约血清培养的嗅鞘细胞移植,按1μL/点脊髓内注射109 L-1嗅鞘细胞,注入速度为1μL/min,继续喂养2个月.中药灌胃组:瘘症方[l]约连续灌胃1个月,继续喂养1个月.设寺正常对照组.主要观察指标:应用ELISA抗原竞争法、PT-PCR疗法榆测各组大鼠神经营养素3蛋白及mRNA的变化.结果:与模犁组、DF一12培养液组比较.痿疗方和嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中神终营养素3蛋f1及神经营养索3 mRNA表达均明显增加.痿症方含药血清培养的嗅鞘细胞移植与单纯嗅鞘细胞移植相比,脊髓组织中神经营养索3蛋F1及神经营养素3 mRNA表达增加明辊.与单纯瘘症方相比,痿症方含药血清培养的嗅鞘细胞移植脊髓组织中神经营养素3增加不明显,差异不显著,神经营养素3 mRNA表达差异显著(P<0.01).结论:痿症方和嗅鞘细胞移植均可促进脊髓组织中神经营养素3的表达,但痿症方含药血清培养的嗅鞘细胞与单纯痿症方治疗相比.结果未能在体现出差异.
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大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后病理与后肢肌力的变化
目的 观察大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后脊髓病理与后肢运动功能的变化.方法 构建大鼠T9脊髓慢性压迫性损伤模型,30只Wistar大鼠按完全随机法分组:假手术对照组(5只)、慢性压迫组(5只)、减压组(20只),减压组分为减压后1周、2周、4周、6周,采用斜板试验,观察大鼠后肢功能;利用HE染色、NissⅠ染色和TUNEL染色方法,观察受压部位脊髓及临近上下节段的脊髓前角病理变化和细胞凋亡现象.结果 慢性压迫组大鼠斜板试验角度明显低于对照组(P＜0.01),脊髓减压后第1周,斜板角度显著提高(P＜0.01),随着时间延长后肢肌力逐渐增强;受压部位脊髓减压后早期病理变化无明显改变,减压后第2周细胞凋亡指数仍较高,为(24.31±4.73)％,与慢性压迫组差异无统计学意义(P＞0.05);临近上下节段脊髓减压后早期病理恢复可见,细胞凋亡率于减压后1周显著下降(P＜0.05),分别为(15.21±4.81)％和(16.21±3.98)％,以后继续降低.结论 大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后,其早期的后肢运动功能恢复,可能主要因受压部位临近上下节段脊髓功能代偿所致.
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MMP-2、12的表达与兔脊髓慢性渐进性损伤后的关联性研究
目的:观察兔脊髓慢性渐进性压迫后损伤段脊髓内MMP-2、12的表达及与损伤程度的相关性.方法:将50只健康青紫蓝家兔随机分为A组(假手术组)25只、B组(SCI组)25只.A组切开皮肤后即可缝合作为对照,B组采用颈入路经C4、C5椎体分别置入直径4mm的螺钉,每隔4周拧进0.75～1mm.经4次手术,造成25只兔颈髓腹侧的慢性渐进性压迫,椎管侵占率约为50％,术后饲养3～6个月.两组脊髓组织取材时间分为术前1月、术后1月、术后2月、术后4月、术后6月.以伤处为中心取出的脊髓组织分为两部分,一部分做石蜡包埋和切片,采用免疫组化检测MMP-2的表达,另一部分组织进行PCR检测MMP-12的表达,观察脊髓慢性渐进性压迫后MMP-2、12的表达变化与脊髓损伤程度的相关性;并于每次手术后通过斜板试验、改良Tarlov评分、BBB评分评价家兔行为学变化.结果:(1)两组术前MMP-2、12的表达、行为学评定等比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)手术后各时间点均有MMP-2、12表达,但同一时间节点A与B组比较差异有统计学意义(P＜0.05);随着压迫程度的加重,B组MMP-2、12表达明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),A组各时间点表达均维持在相对稳定水平.(3)各时间点兔后肢运动功能评分及斜扳试验评分A组明显高于B组,B组同时间点评分低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:兔慢性脊髓损伤后MMP-2、12的表达明显升高,并随着脊髓压迫程度的加重,MMP-2、12的表达也相应增高.
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痿症方联合嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓慢性压迫损伤后NCAM-mRNA表达的影响
目的:研究痿症方联合嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)的移植对脊髓慢性压迫损伤后神经细胞黏附因子(neural cell adhesion molecule, NCAM)的影响,探索OECs促进脊髓再生的机制.方法:将体外培养的OECs制成细胞悬浮液移植到脊髓慢性压迫损伤的动物模型中,运用适时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction, real-time RT-PCR)的方法检测NCAM-mRNA表达.结果:脊髓损伤后脊髓组织中NCAM-mRNA的表达增加,与正常组相比具有非常显著性差异(P<0.01);嗅鞘细胞移植利痿证方均能增强NCAM-mRNA的表达,与模型组相比具有显著性差异(P<0.05);痿证方中药血清培养的嗅鞘细胞移植也能增强NCAM-mRNA的表达,与单纯嗅鞘细胞移植组相比具有显著性差异(P<0.05).结论:大鼠脊髓慢性损伤后脊髓组织中NCAM-mRNA的表达增强,嗅鞘细胞移植和痿证方均能进一步增强NCAM-mRNA的表达,两者具有协同作用.
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大鼠脊髓慢性压迫性损伤病理变化的实验研究
目的:系统探索大鼠脊髓慢性压迫性损伤模型病理形态改变.方法:应用平头不锈钢螺钉从大鼠第4颈椎(C4)椎体前侧钻入压迫脊髓腹侧,螺钉侵占脊髓深度分别为0.4、0.8、1.3mm ,并规定为轻、中、重压迫.术后保留螺钉30天,用一般观察、大体观察、光镜、电镜病理检查来研究脊髓损伤病理变化.结果:随着压迫深度的不同,大鼠出现不同程度的瘫痪及形态改变;大体观察受压部位脊髓组织轻压仅呈现一凹陷,中压组织质地变性,重压组织变性软化坏死,部分病理坏死波及背侧;光镜神经细胞减少、肿胀、萎缩、核溶解消失,胶质细胞增生,中央管狭窄,神经纤维减少、脱髓鞘、排列紊乱;电镜神经细胞凋亡、线粒体肿胀、断裂、尼氏体减少,细胞器空化,神经纤维髓鞘板层结构疏松、断裂、融合.结论:慢性持续性压迫能引起脊髓不同程度的组织病理形态的改变,观察、总结其变化为进一步研究脊髓慢性压迫损伤病理机制,研究有效治疗方案提供了判断的指标.
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脊髓慢性损伤的病理生理及修复
脊髓慢性损伤(Spinal chronic injury,SCI)是静态和动态机械因素共同作用的结果.静态因素包括导致椎管直径减小的所有原因.动态因素是由于活动椎体期间通过原有机械压迫对脊髓的重复性创伤[1].SCI的研究已有近百年的历史,由于高度模拟临床的动物模型建立困难等许多原因,SCI的病理生理机制及再生修复尚不明确.本文就SCI的病理生理及再生修复作一综述.
