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锌转运体3、TSQ及Zinquin三种荧光染色对癫痫小鼠海马苔藓纤维出芽的研究
目的 研究锌转运体3、TSQ及Zinquin荧光染色在癫痫小鼠海马苔藓纤维出芽的染色情况.方法 小鼠腹腔注射匹罗卡品建立小鼠癫痫模型,应用锌转运体3、TSQ及Zinquin三种荧光染色技术对造模后15d,30d,60d的模型小鼠苔藓纤维出芽进行标记染色.结果 在造模后15d,三种荧光染色开始出现在小鼠海马的颗粒细胞层.造模后30d,三种荧光染色出现在海马内分子层.而在造模后60d,海马内分子层芽生的苔藓纤维的荧光染色进一步加强.结论 锌转运体3、TSQ及Zinquin三种荧光染色可以做为苔藓纤维出芽的标记方法.
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地高辛原位杂交显示锌转运体 3 mRNA 在脑、脊髓和脊神经节中的分布
目的:为研究锌转运体 3(ZnT3) 在神经系统功能中的作用提供形态学依据.方法:制备带有地高辛标记物的 ZnT3反义 RNA 探针,取雄性 SD 大鼠脑、脊髓和脊神经节行冷冻切片,作 ZnT3 mRNA 原位杂交组织化学显色,杂交后用 AKP标记的抗地高辛抗体显色.结果:脑内 ZnT3 mRNA 主要分布于海马结构,包括街状回颗粒细胞和 CAl～CA4 区的锥体细胞,在梨状皮质、扣带后皮质中也有分布,显示的细胞较小;腩干中也有 ZnT3 mRNA 分布,面神经核处分布较多,网状结构中有少量分布;脊髓灰质前角内有少数胞体较大的细胞呈 ZnT3 mRNA 阳性;脊神经节内的多数神经元呈 ZnT3 mRNA 强阳性.结论:ZnT3 mRNA 主要分布于海马、大脑皮质、杏仁核、脑干网状结构等可塑性较强结构和周围神经神经元中,提示ZnT3 可能在学习、记忆、初级感觉传入和肌运动调控等方面发挥重要作用.
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不同饲料锌水平对哺乳期后幼鼠大脑及睾丸组织ZnT3mRNA表达的影响
目的:观察哺乳期后幼鼠在不同饲料锌水平条件下的生长情况,探讨饲料中锌水平对幼鼠大脑皮质、海马及睾丸组织锌转运体3(ZnT3)mRNA表达的影响.方法:20只雄性3周龄ICR幼鼠(P21)随机分为饲料缺锌(ZD,Zn 1 mg/kg)、适锌(ZA,Zn 30 mg/kg)、高锌(ZS,Zn 180 mg/kg)、高锌对喂(PF,Zn 180 mg/kg,每日饲料投放量依据缺锌组每日摄食量确定)4组,以相应饲料饲喂3周(P21～P42),观察小鼠P21～P42期间的摄食量及体质量变化.饲喂3周后,处死小鼠取血清及大脑皮质、海马、睾丸组织,以原子吸收分光光度法测定小鼠血清锌含量,半定量RT-PCR法检测分析不同饲料锌水平幼鼠P42时相应组织中ZnT3 mRNA的表达.结果:断乳幼鼠饲喂不同水平锌饲料3周后,ZD组幼鼠摄食量及体质量显著低于其余各组(P＜0.05,P＜0.01),血清锌也显著低于其余各组(P＜0.05,P＜0.01).P42时ZD小鼠睾丸及皮质中ZnT3 mRNA表达显著降低(P＜0.05),PF小鼠海马中ZnT3 mRNA表达高于其他各组(P＜0.05).结论:哺乳期后保证饲料中足量锌对幼鼠的生长发育十分重要;饲料缺锌显著降低哺乳期后小鼠睾丸及皮质ZnT3 mRNA表达,这种基因表达变化可能是哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制.
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低锌饮食对大鼠二次打击惊厥模型远期惊厥阈和锌转运体3的影响
目的:探讨低锌饮食对大鼠二次打击惊厥模型远期惊厥阈、死亡率和锌转运体3(ZnT3)的影响.方法:60只27日龄(P27)健康雄性SD大鼠随机分为4组,惊厥组和惊厥低锌饮食组在P27腹腔注射氯化锂、在P28腹腔注射匹罗卡品致惊厥持续状态模型,观察大鼠惊厥发作情况,将达到Ⅳ级及以上痫性发作的视为造模成功.对照组和低锌饮食组在相同时间腹腔注射生理盐水.致惊厥前2天(即P27、P28)4组均予常锌饮食(锌44 mg/kg)喂养,致惊厥后(即P28后)对照组和惊厥组继续予常锌饮食喂养,而低锌饮食组和惊厥低锌饮食组予低锌饮食(锌2.7 mg/kg)喂养.2周后予青霉素二次打击,记录大鼠首次出现惊厥发作的时间(惊厥阈)、死亡时间及死亡率,观察时间为1 h.观察结束后取各组大鼠皮层组织,蛋白质印迹法检测ZnT3的表达.结果:大鼠的持续惊厥模型诱导成功率为72.5％(29/40),死亡率为24.1％(7/29).惊厥第3天、5天、7天惊厥组、惊厥低锌饮食组体重明显低于对照组(P<0.05);惊厥第9天惊厥低锌饮食组体重明显低于对照组(P<0.05).惊厥组和惊厥低锌饮食组血清锌浓度均明显低于对照组(P<0.05).低锌饮食组、惊厥组、惊厥低锌饮食组惊厥阈明显低于对照组(P<0.05),惊厥低锌饮食组明显低于低锌饮食组和惊厥组(P<0.05).惊厥低锌饮食组生存时间明显低于对照组和低锌饮食组(χ2分别为9.994、6.707,均P<0.05).对照组、低锌饮食组、惊厥组和惊厥低锌饮食组存活率分别为80％、60％、50％、20％,无统计学差异(P=0.073).低锌饮食组、惊厥组及惊厥低锌饮食组ZnT3蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),惊厥低锌饮食组明显低于惊厥组和低锌饮食组(P<0.05).结论:惊厥可致大鼠血清锌浓度降低,缺锌膳食能增加惊厥后再次打击时惊厥发作的易感性,二者互为增强效应,这种现象可能是通过下调ZnT3的表达,破坏大脑锌稳态而导致.
