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温热中药对大鼠背根神经节细胞寒、热敏感蛋白TRPM8、TRPV1的作用研究
目的:探讨温热中药黑顺片、干姜、肉桂、仙茅对大鼠背根神经节细胞中寒、热敏感蛋白TRPM8、TRPV1的影响.方法:培养原代大鼠背根神经节细胞, 应用温热中药黑顺片、干姜、肉桂、仙茅进行干预, 观察各种细胞的增殖情况, 并应用RT PCR、Westernblot方法检测各组细胞的TRPM8、TRPV1及PPKA的基因、蛋白的表达.结果:与空白对照组比较, 温热药可提高细胞TRPV1及PPKA基因、蛋白表达, 可降低TRPM8基因、蛋白表达, 温热药对背根神经节细胞TRPV1/TRPM8的增高显著高于空白对照组.结论:温热药可能调控神经的TRPV1和TRPM8表达, TRPV1/TRPM8可能是反映温热药的温热药性的表达指标之一, 一定程度上揭示温热中药的药性生物学机制.
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基于热敏感蛋白TRPV1的温热药性表达研究
目的:探讨温热药对虚寒动物的热敏感蛋白(transient receptor potential vanilloid type-1,TRPV1)及体内cAMP(CyclicAdenosine monophosphate)/PKA(protein kinase A)信号通路影响.方法:建立大鼠虚寒模型,应用温热中药黑顺片(30 g生药/kg)、干姜(20 g生药/kg)、肉桂(10 g生药/kg)及仙茅(30 g生药/kg)进行干预,应用放免法检测血清促甲状腺素(thyroid stimulating hor-mone,TSH)、甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、皮质酮(Corticosterone,COR)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP),应用免疫组化法检测大鼠下丘脑、海马、背根神经节中热敏感蛋白(TRPV1)、磷酸化蛋白激酶A(Phospho-(Ser Thr) PKA,PPKA)蛋白表达.结果:虚寒组大鼠出现活动减退、爱扎堆、毛色枯萎等现象,血清中TSH、T3、T4、COR、cAMP、cGMP含量降低,大鼠下丘脑、海马、背根神经节中TRPV1、PPKA蛋白表达明显降低,黑顺片(30 g生药/kg kg)、干姜(20 g生药/kg)、肉桂(10 g生药/kg)及仙茅(30g生药/kg)干预后,大鼠活动性增加,毛色改善,血清中TSH、T3、T4、COR、cAMP、cGMP含量明显升高,大鼠下丘脑、海马、背根神经节中TRPV1、PPKA表达明显增强.结论:热性药可改善虚寒状态内分泌水平,其作用机制可能与增强虚寒机体时下调的TRPV1、PPKA蛋白表达有关,从而表达出温热药性.
关键词： 温热药 TRPV1 cAMP-PKA通路 -
寒热性中药的成分对TRPV1通道蛋白功能的影响
目的:探讨寒热中药的成分对TRP家族中TRPV1通道蛋白功能的影响.方法:以辣椒素为TRPV1通道激动剂,采用共聚焦显微成像法在体外观察原代培养DRG神经元胞内[Ca~(2+)]i的变化.结果:寒性中药的成分大黄素可显著下调TRPV1通道蛋白的功能,热性中药的成分桂皮醛可显著上调TRPV1通道蛋白的功能;寒性成分黄芩甙对TRPV1通道蛋白功能虽未见显著影响,但有下调趋势,热性成分吴茱萸碱对TRPV1通道蛋白功能也未见显著影响,但有上调趋势.结论:寒热性中药成分对TRPV1功能的调节可能与中药的寒热药性相关,这可能是寒热性中药临床上发挥寒热调节作用的分子机制之一.
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siRNA介导靶向下调TRPV1对偏头痛大鼠的影响及可能机制研究
目的:分析siRNA介导靶向下调瞬时感受器电位香草酸受体(transient receptor potential vanilloid,TRPV1)对偏头痛大鼠的影响,并探讨其可能机制.方法:选取24只成年雌性SD大鼠,采用硝酸甘油皮下注射法建立偏头痛模型,造模成功后根据处理方式不同分为siRNA-TRPV1组、siRNA空载组和空白对照组,每组8只.采用实时荧光定量PCR法检测各组血液TRPV1mRNA表达情况;观察三组大鼠各时间段爬笼、挠头次数;并采用ELISA法检测对应时间小鼠血液缓激肽(bradyki-nin,BK)、前列腺素E(PGE)、趋化因子2(CCL2)和5-羟色胺(5-HT)表达水平,同时分析其与TRPV1mRNA的关系.结果:siRNA-TRPV1组、siRNA空载组和空白对照组三组大鼠血液TRPV1mRNA相对水平、BK、PGE、CCL2和5-HT比较差异具有统计学意义(P<0.001),siRNA-TRPV1组明显低于siRNA空载组和空白对照组(P<0.001),但siRNA空载组和空白对照组两组比较差异无统计学意义(P>0.05).经Pearson法分析得知,TRPV1mRNA与BK、PGE呈正相关(r=0.631/0.694/0.654/0.663,P=0.001/0.001/0.001/0.001).siRNA-TRPV1组、siRNA空载组和空白对照组三组大鼠耳红开始时间、结束时间及各时间段爬笼及挠头次数比较差异均具有统计学意义(P<0.05),且表现为siRNA空载组和空白对照组两组比较差异无统计学意义(P>0.05),siRNA-TRPV1组开始时间晚于以上两组,而结束时间则早于前两组(P<0.05);siRNA-TRPV1组各时间段爬笼及挠头次数明显少于siRNA空载组和空白对照组(P<0.05).结论:靶向下调TRPV1可明显减少硝酸甘油致偏头痛大鼠爬笼、挠头等症状发生次数,与BK、PGE、CCL2和5-HT等相关炎症因子水平降低相关,为偏头痛患者的有效治疗提供了新思路.
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基于热敏通道TRPV1探讨吴茱萸汤对醋酸内脏痛模型小鼠的止痛作用
目的:探讨吴茱萸汤对醋酸诱导的内脏痛模型小鼠的止痛作用.方法:在醋酸诱导的内脏痛模型小鼠上,结合扭体实验及免疫组织化学染色探查吴茱萸汤的止痛作用与TRPV1的关联.结果:与模型组对比,吴茱萸汤组可显著降低小鼠扭体行为差异极显著(P＜0.01),同时,吴茱萸汤组小鼠第1次扭体行为出现时间明显延迟,差异显著(P＜0.05);与正常组对比,模型组结肠组织中TRPV1阳性表达显著增多差异极显著(P ＜0.001),而吴茱萸汤组小鼠结肠粘膜层与肌层的TRPV1阳性表达明显减少,与模型组对比差异极显著(P ＜0.001).结论:热敏通道TRPV1是吴茱萸汤发挥止痛作用的关键环节.
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MiR-139-3p通过靶向下调TRPV1缓解大鼠神经病理性疼痛
目的:研究miR-139-3p在大鼠神经病理性疼痛发生发展中的作用及其作用机制.方法:将大鼠随机分为假手术组(sham)、坐骨神经慢性压迫损伤模型组(chronic constriction injury group,CCI)、2 mg/kg miR-139-3p模拟物(mimic)鞘内注射组、4 mg/kg miR-139-3p mimic鞘内注射组.术后的第14d,Real-time PCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-139-3p及TRPV1的表达.于注射前及注射后的第1、3、7、14 d,利用von Frey检测大鼠机械性痛阈及热辐射法检测大鼠热痛阈值.Western Blot法检测DRG中TRPV1的表达;ELISA法检测脊髓L4-L5组织中TNF-α及IL-1β的含量;双荧光素酶报告基因法检测miR-139-3p与TRPV1的靶向关系.结果:(1)与sham组相比较,miR-139-3p在CCI大鼠DRG中的表达显著下降,而TRPV1的表达显著上升(P＜0.05).(2)与sham组相比较,CCI组中大鼠机械刺激缩足反射阈值及热刺激缩足反射潜伏期显著下降(P＜0.05);而与CCI组相比较,鞘内注射miR-139-3p mimic可显著促进大鼠机械刺激缩足反射阈值及热刺激缩足反射潜伏期的上升,抑制TRPV1的表达(P＜0.05).(3)与sham组相比较,CCI组大鼠TNF-α及IL-1β含量显著上升(P＜0.05);而与CCI组相比较,鞘内注射miR-139-3p mimic可显著抑制TNF-α及IL-1β的产生(P＜0.05).(4) miR-139-3p mimic转染可显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度.结论:miR-139-3p通过靶向下调TRPV1的表达缓解大鼠神经病理性疼痛.
关键词： miR-139-3p TRPV1 神经病理性疼痛 大鼠 -
TRPV1通道在炎症痛觉过敏中的作用及其影响因素
辣椒素受体自1997年从感觉神经元分离和克隆成功,就成为了疼痛领域研究的热点之一.TRPV1在下丘脑以及外周初级感觉传入神经元,特别是中小型神经纤维有着较高的表达,在星形胶质细胞、小胶质细胞,人组织的血管平滑肌,支气管上皮细胞,胃肠道细胞等也表达有TR-PV1[1,2].TRPV1是一种伤害性感受器,能够被辣椒素、伤害性热刺激和酸化等特异性激活.炎性痛具有持续性疼痛、诱发性疼痛阈值降低、超过阈值的刺激疼痛更加强烈等特点.近年来研究发现TRPV1在炎症引起的痛觉过敏中起着重要作用.炎症发生时,炎性因子与神经元上各自的受体结合,通过各自胞内信号通路作用于TRPV1,引起中枢或外周神经敏化,表现为痛觉过敏.近年来国内外学者对TRPV1在炎症痛觉过敏中的作用进行了较为深入的研究,本文就此做一综述.
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TRPV1在脑的表达模式
TRPVl( transient receptor potential vanilloid type -1,瞬时受体电位香草素亚型1)是一种钙离子高通透性的非选择性阳离子通道.它是香草素瞬时受体电位家族的成员,其开始被定义为是辣椒有效成分--辣椒素的受体(Caterina等,1997).TRPV是一种多形性的瞬时受体电位通道,它能够被伤害性热、酸碱度改变、脂肪酸酰胺以及内源性脂质配体等激活(Ross,2003).TRPV1作为一种周围神经系统伤害性刺激的分子探测器这一事实已得到广泛的认可(Caterina和Julius,2001).
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TRPV1在皮肤中的分布及其介导的生理病理活动
TRPV1 (transient receptor potential vanilloid-1),属于 transient receptor potential protein(TRP)蛋白家族,是一种可高效介导Ca2+流入的阳离子通道,广泛分布于神经元、免疫细胞、多种脏器上皮细胞及角质形成细胞等细胞中.该通道可通过变构调节被多种内源性及外源性刺激激活,介导细胞凋亡、分化、炎症因子分泌等多种生理病理活动.本文主要综述TRPV1的发现过程、蛋白分子结构、激活模式以及 TRPV1在皮肤中的分布及其介导的生理病理活动,以进一步探索TRPV1在皮肤疾病发生、发展中所起的作用.
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浅谈唐辛子之"辛辣"的应用价值
提要笔者在查阅有关唐辛子-辣椒的现代研究时,发现了较多与之相关的其他知识及理解,本文将这一成分的解读出发,探讨其目前在临床研究现状,为唐辛子在的肠道菌群及肥胖方面的进一步研究提供参考.
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不同频率振法干预废用性肌萎缩大鼠的trpv1通道研究
目的：探讨不同频率振法对制动肌肉萎缩大鼠神经纤维的trpv1的通道表达的影响。方法：采用SD大鼠72只，随机分为空白组和模型组，A组（100次/min，5min）、B组（300次/min，5min）、C组（500次/min，5min）、D组（800次/min，5min），每组12只；模型组大鼠以后肢制动方法为废用模型，制动一周后，A、B、C、D组予振法干预，每日2次。干预1周后，比较各组大鼠比目鱼肌神经纤维的trpv1的通道表达。结果：模型组的比目鱼肌神经纤维的trpv1表达弱于空白组，300次/min、500次/min组的trpv1表达强于空白组，有显著差异，300次/min佳。结论：制动大鼠肌肉萎缩的神经冲动呈减弱趋势，振法可以促进制动大鼠肌肉萎缩的神经冲动，以300次/分佳。
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辣椒素对大鼠内脏机械刺激敏感性的影响及机制
目的:研究小剂量辣椒素(capsaicin,CAP)对大鼠内脏机械刺激敏感性的影响及机制.方法:SD大鼠60只,随机分为实验组(A组,喂食CAP饲料),对照组(B组,喂食普通饲料) 实验分为3期(Ⅰ期:喂食1天;Ⅱ期喂食1周;Ⅲ期:喂食4周),A组分为A1、A2、A3组,B组分为B1、B2、B3组,每组10只.每组检测内脏对机械刺激的敏感性;胃、十二指肠粘膜屏障及TRPV1的表达.结果:(1)机械刺激敏感性:A2组显著高于B2组(P＜0.05);A3组显著低于B3组(P＜0.05).(2)胃、十二指肠粘膜屏障完整.(3)TRPV1的表达:A2组显著高于B2组(P＜0.05).结论:小剂量CAP可改变大鼠内脏机械刺激的敏感性,这可能和胃、组织TRPV1的表达有关.
