首页 > 文献资料
-
氯化饮水有机提取物诱导人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与RAS基因表达的研究
目的 研究武汉市主要水源D湖氯化饮水有机提取物对人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与RAS基因表达的诱导,探讨氯化饮水有机提取物诱导遗传损伤的分子机制.方法 以L-02细胞作为靶细胞,应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)测定DNA链断裂及用原位杂交试验(ISH)测定RAS基因表达.氯化饮水有机提取物设0.167、1.67、16.7、167水样ml/ml培养液4个剂量,DMSO(10ml/L)为溶剂对照,B(a)P(200μmol/L)为阳性对照.结果 与溶剂对照相比,氯化饮水有机提取物在较高剂量组(16.7和167 L/L水样培养液)能引起DNA链断裂程度的明显增加;不同浓度的氯化饮水有机提取物均可使RAS基因表达水平明显增加.氯化饮水有机提取物在0.167、1.67、16.7L/L水样培养液的浓度范围内,其RAS基因表达水平和DNA迁移度呈高度正相关(r=0.99).结论 氯化饮水有机提取物可诱导L-02细胞DNA损伤与RAS基因表达,RAS基因表达水平可能与DNA损伤程度有关.
-
饮水氯化消毒副产物MX诱导人胚肝细胞氧化应激及其与DNA损伤的关系
目的 研究饮水氯化消毒副产物3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(MX)对体外培养的人胚胎肝细胞(L-02细胞)氧化应激的诱导. 方法 MX设10、30、100和300 μmol/L 4个暴露浓度,二甲基亚砜(DMSO,10 ml/L)为溶剂对照,将L-02细胞染毒24小时后,检测L-02细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量. 结果 与溶剂对照相比,30、100和300 μmol/L的MX能明显增加L-02细胞MDA含量(P＜0.05,P＜0.001,P＜0.001),100、300 μmol/L的MX使L-02细胞GSH水平显著性降低(P＜0.001,P＜0.001)、8-OHdG含量显著性增加(P＜0.05,P＜0.01).在MX 0～300 μmol/L浓度范围内,L-02细胞的MDA含量与8-OHdG含量呈正相关(r=0.767,P＜0.01);GSH水平与8-OHdG含量呈负相关(r=0.761,P＜0.01). 结论 MX可诱导L-02细胞氧化应激,使其脂质过氧化反应增强、抗氧化作用降低、DNA氧化损伤增加.MX引发的脂质过氧化反应和抗氧化力下降是DNA氧化损伤的影响因素之一.
-
饮水氯化消毒副产物MX对人胚肝细胞(L-02)的DNA损伤及凋亡作用
目的 研究饮水氯化消毒副产物3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(MX)致人胚肝细胞(L-02)DNA损伤及凋亡作用.方法 以L-02为靶细胞,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)分别检测MX致L-02细胞DNA损伤及凋亡作用.结果 随着MX浓度的增加,L-02细胞DNA链断裂逐渐增加,且100和300μmol/L剂量组与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异(P＜0.05,P＜0.01);MX各剂量组均引起L-02细胞凋亡率明显增加,与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异(P＜0.001).结论 饮水氯化消毒副产物MX可致L-02细胞DNA单链断裂和凋亡.
-
荷叶铁线蕨水提液对人胚肝细胞增殖和功能的影响
目的:研究荷叶铁线蕨对人胚肝细胞增殖和功能的影响.方法:人胚肝细胞L-O2 96孔板104/孔培养,经质量浓度为1g·mL-1荷叶铁线蕨水提液梯度稀释后处理24 h,采用MTT法检测细胞增殖情况；溴甲酚绿比色法检测白蛋白分泌水平；酶标仪法测定乳酸脱氢酶(LDH)活力.结果:荷叶铁线蕨水提液可以促进人胚肝细胞增殖,且具有剂量依赖性；在药物质量浓度为100 g·L-1时细胞白蛋白分泌量达到高2.14 g·L-1,并显著降低了LDH的活力(P＜0.05).结论:荷叶铁线蕨水提液可以促进人胚肝细胞增殖,增强细胞保肝降酶作用.
-
低剂量镉和汞单独及联合作用对人胚肝细胞生长的Hormesis效应及机制研究
目的 探讨低剂量重金属镉、汞单独及等浓度联合作用对人胚肝细胞(LO2)生长的兴奋效应及可能的机制.方法 以体外培养的LO2细胞为实验对象,不同浓度的镉、汞单独及等浓度(0.01～100 μmol/L)联合处理LO2 24 h后,用Vi-CELLTM XR活力分析仪分析细胞生长状况；根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型；按照二硫代二硝基苯甲酸比色法和黄嘌呤氧化酶法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)与超氧化物歧化酶(SOD)的活力；依据Parvinder Kaur的检测方法检测细胞内ROS水平；火焰原子吸收光谱法及原子荧光法分别检测细胞内镉、汞吸收量.结果 低剂量的镉、汞(0.01、0.05、0.25 μmol/L)单独染毒及镉+汞(0.01,0.05 μmol/L)联合染毒处理24h能明显刺激LO2细胞生长；Finney数学模型显示镉、汞等浓度联合作用于LO2细胞24h后Q=1.9,说明其联合作用属于相加作用；低剂量的镉、汞单独及联合染毒LO2细胞24h均能明显诱导SOD与GSH-Px活力升高,当剂量增大到一定水平(25.6 μmol/L)后又抑制两种酶活力.细胞内ROS水平与重金属吸收量随染毒剂量增加而增加.结论 低浓度重金属镉、汞单独及等浓度联合作用对LO2生长存在Hormesis效应,其机制可能是低浓度镉、汞诱导细胞GSH -Px、SOD活力增强,清除过量的自由基,保护细胞免受氧化损伤,提高细胞存活率.
-
镉与汞联合作用对人胚肝细胞凋亡和DNA损伤的影响
目的 研究镉与汞单独及联合染毒对人胚肝细胞(L02细胞)凋亡及DNA损伤的作用.方法 以0.01～100μmol/L的氯化镉、氯化汞以及等浓度的氯化镉、氯化汞混合液对L02细胞染毒24 h,采用MTT法测定细胞的存活率,根据Finney法判断镉与汞对L02细胞的联合作用类型；采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测L02细胞的DNA损伤和细胞凋亡情况.结果 0.01 μmol/L的氯化镉、氯化汞单独及联合染毒可以刺激细胞的生长,但≥1μmol/L的氯化镉、氯化汞单独及联合染毒可显著抑制细胞的生长；且联合作用表现为相加作用.镉、汞单独及联合作用可致L02细胞的DNA损伤率和细胞凋亡率均显著高于对照组；且随着染毒浓度的升高,L02细胞的DNA损伤率和细胞凋亡率均呈上升趋势.结论 镉汞联合染毒引起的DNA损伤和细胞凋亡可能存在一定的协同效应,这可能是由于镉、汞诱导细胞发生氧化应激所致.
-
氟对人胚肝细胞DNA损伤及凋亡的影响
目的探讨氟对人胚肝细胞(L-02细胞)DNA损伤及诱导凋亡的作用.方法采用40,80,160μg/ml氟化钠对培养的人胚肝细胞进行染毒,24 h后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测氟化物对人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡情况.结果氟组人胚肝细胞DNA损伤率明显高于对照组,Ridit值分别为0.582,0.815,0.892;中、高剂量氟组人胚肝细胞凋亡百分率(9.293±1.171),(11.727±1.196)均明显高于对照组(5.343±1.620).同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤率和凋亡率的差异也存在显著性差异(P＜0.05).结论氟化物具有引起人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡的作用,并呈现一定的剂量-效应关系.
-
牛磺酸对苯并(a)芘致人胚肝细胞损伤拮抗作用
目的 探讨牛磺酸对苯并(a)芘致肝细胞DNA损伤的作用和机制.方法 以人胚肝细胞为靶细胞体外培养,按完全随机实验设计分成5个组:(1)空白对照组;(2)溶剂对照组;(3)苯并(a)芘组:25 μmol/L苯并(a)芘加入细胞培养体系后培养2 h;(4)牛磺酸组:设0.5,1.0,2.0,4.0 μmol/L 4个浓度,加入培养体系后培养24 h;(5)牛磺酸预防组:先以4个不同浓度的牛磺酸预处理24 h,再加入25 μmol/L的苯并(a)芘,培养2 h.各组培养结束后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测细胞DNA损伤,用分光光度法测定细胞培养液中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、天门冬酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量.结果 (1)微量苯并(a)芘可致人胚肝细胞NDA明显损伤,同时使MDA、ALT、AST水平升高、GSH含量降低,牛磺酸的作用则相反;(2)牛磺酸预处理可明显减轻苯并(a)芘引起的人胚肝细胞DNA损伤,抑制MDA、AST、ALT含量升高和GSH含量下降,其作用呈剂量-效应关系;(3)人胚肝细胞DNA损伤的Oliver尾矩值与细胞培养液中MDA、AST、ALT含量呈明显正相关,与GSH含量呈明显负相关.结论 苯并(a)芘致人胚肝细胞DNA损伤可能与氧化损伤有关,而牛磺酸具有拮抗苯并(a)芘致人胚肝细胞DNA损伤的良好作用.
关键词： 牛磺酸 苯并(a)芘 人胚肝细胞 DNA损伤 单细胞凝胶电泳(SCGE) -
牛磺酸对苯并(a)芘致L-02细胞损伤保护作用
目的 研究牛磺酸对苯并(a)芘(B(a)P)致人胚肝细胞(L-02细胞)染色体损伤的保护作用.方法 以L-02细胞为靶细胞,按完全随机设计分成5组:(1)空白对照组;(2)溶剂对照组;(3)B(a)P染毒组:设12.5,25,50μmol/L3个剂量染毒细胞;(4)牛磺酸组:设1.0,2.0,4.Ommol/L3个浓度,加入培养体系后继续培养24h;(5)牛磺酸预防组:L-02细胞先以3个不同浓度的牛磺酸预处理24h,再加入25μmol/L的B(a)P培养24h.各组均设3个平行样.收获细胞后用微核实验检测染色体损伤,计算微核率和核分裂指数.结果 牛磺酸单独作用于L-02细胞时,与空白对照组比较,中、高浓度牛磺酸诱导的微核率降低,核分裂指数增高,差异有统计学意义.从低到高3个剂量B(a)P单独染毒L-02细胞诱导的微核率为(34.67±2.52),(45.33±4.16),(60.00±7.21)%.核分裂指数分别为1.326±0.034,1.228±0.006,1.148±0.012,与溶剂对照组比较微核率升高,核分裂指数降低,差异有统计学意义,且两者均呈明显的剂量-反应关系.低、中、高浓度牛磺酸预防组诱导的微核率对应为(30.33±3.51),(25.67±1.53)和(23.00±1.00)%.均比单纯25μmol/LB(a)P染毒组诱导的微核率降低,差异有统计学意义.低、中、高浓度牛磺酸预防组对应的核分裂指数为1.455±0.011,1.474±0.015和1.1492±0.013,比单纯25μmol/L B(a)P染毒诱导的核分裂指数高,差异有统计学意义,且两者均呈剂量-反应关系.结论 B(a)P能诱导肝细胞染色体损伤,且存在明显的剂量-反应关系;牛磺酸预处理对B(a)P引起的肝细胞毒性具有明显保护作用.
-
氟对人胚肝细胞P53表达的影响
[目的]探讨氟对人胚肝细胞(L-02细胞)P53表达的影响. [方法]对体外培养的人胚肝细胞染毒氟化钠40、80、160μg/ml 24h后,分别采用MTT试验、蛋白印迹技术(Western blot)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测人胚肝细胞存活率、P53蛋白和mRNA水平. [结果]高浓度氟组细胞存活率显著低于对照组(P＜0.01);中、高浓度氟组细胞P53蛋白水平均显著高于对照组(P＜0.01),且随氟浓度增加而升高;低浓度氟组与对照组差异没有显著性(P＞0.05);各氟染毒组P53mRNA的表达量均显著高于对照组(P＜0.01),低、中浓度氟组P53mRNA表达量随染氟浓度的增高而增加;高浓度氟组的P53mRNA表达量虽然与对照组有显著性差异(P＜0.01),但相对于中浓度氟组来说,已呈现出下降的趋势,与低浓度氟组水平相当. [结论]高氟可使人胚肝细胞的存活率下降,并诱导P53表达,但P53mRNA和P53蛋白的变化趋势并不完全一致.
-
MTT法检测雷公藤不同炮制品对L-02细胞增殖影响的实验研究
目的:研究雷公藤经不同方法炮制后降低肝脏毒性的可能性.方法:MTT法检测其不同炮制品水提物对L-02细胞增殖的影响.结果:在3mg/ml、15mg/ml两个浓度下,其炮制品对L-02细胞的增殖抑制作用均小于饮片(P＜0.05).结论:雷公藤通过炮制来降低对肝脏的损伤具有可行性.
-
氟对人胚肝细胞氧化应激、DNA损伤及凋亡的影响
目的研究氟对人胚肝细胞(L-02细胞)氧化应激、DNA损伤及诱导凋亡的作用.方法体外培养的L-02细胞接触40、80、160μg/ml氟化钠24 h,检测L-02细胞脂质过氧化物(LPO)水平,还原型谷胱甘肽(GSH)含量,DNA损伤率,细胞凋亡率和周期构成比的情况.结果氟可使L-02细胞LPO水平升高,GSH含量下降,并且二者均与氟浓度呈明显的剂量-效应关系;氟可使L-02细胞DNA损伤率、凋亡率和S期细胞数明显升高,高剂量氟组DNA损伤率和凋亡率与低剂量氟组之间存在显著性差异.结论氟可致L-02细胞出现氧化应激,引起DNA损伤,诱导细胞凋亡,并且三者之间存在明显的相关关系.
-
人胚肝细胞分离培养研究
目的探讨体外优化培养人胚肝细胞的方法.方法采用胰蛋白酶和聚乙烯吡咯烷酮(pvp),胶原酶,胶原酶和pvp消化法分离人胚肝细胞,并比较3种方法对分离人胚肝细胞的效果.结果运用这三种方法均能成功地培养出原代肝细胞,并能够传代;但胶原酶和pvp消化法分离细胞效果好,细胞贴壁生长能力强.三种消化方法其细胞存活率从高到低依次为胶原酶和pvp消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和pvp消化法.结论人胚肝细胞的分离首选胶原酶和pvp消化法,使用该法在体外培养的人胚肝细胞生长良好,可用于肝细胞移植和生物人工肝等方面的研究.
-
茶多酚对体外培养人胚肝细胞生存率的影响
目的 探讨不同浓度茶多酚对体外培养人胚肝细胞(L-02细胞)生存率的影响.方法 体外培养L-02细胞,采用50、100、250、500、1 000 mg/L浓度的茶多酚分别干预12、24、36、48 h,倒置显微镜观察各组细胞形态学的变化,用噻唑蓝法测定细胞的存活率.结果 与对照组比较,250 mg/L及以上浓度茶多酚组干预12 h后细胞形态即发生变化,初期表现为细胞皱缩、体积变小,而后细胞固缩变为圆形,出现大量漂浮细胞及细胞碎片,形态学变化的程度与茶多酚浓度及作用时间有关.50 mg/L、100 mg/L茶多酚组作用48 h时L-02细胞存活率均高于对照组(P＜0.05);250 mg/L及以上浓度茶多酚组干预后L-02细胞存活率均低于对照组(P＜0.05),并且随着作用时间的延长和茶多酚浓度的增加,L-02细胞存活率减少(P＜0.01).结论 低剂量(≤100 mg/L)茶多酚可能具有促进肝细胞生长、保护肝细胞的作用,较大剂量(≥250 mg/L)则有细胞毒性和抑制细胞生长的作用.
-
黄曲霉毒素B1 致体外人胚肝细胞损伤的研究
目的 探讨黄曲霉毒素B1 ( AFB1 ) 对体外正常人胚肝细胞( L-02细胞)的急性损伤作用. 方法 L-02细胞体外培养,随机分为9组,空白对照组(不加其他试剂) ,溶剂对照组(加入二甲基亚砜) ,不同浓度AFB1 染毒组(分别加入5、10、20、40、80、160、320 mg/L). 细胞培养24 h后观察各组细胞的形态学变化,并应用 MTT 法检测各组细胞吸光度值( A) ,计算细胞毒性指数( CI). 结果 培养24 h后,镜下观察发现随着AFB1 染毒剂量增大,L-02细胞皱缩变形和凋亡逐渐增多,当浓度达到80 mg/L时可见大量漂浮细胞和细胞碎片. 各组细胞吸光度值比较差异有统计学意义(P<0.05),80、160、320 mg/L AFB1 染毒组的吸光度值均低于空白对照、溶剂对照组(P均<0.05),并且随着AFB1 染毒剂量高,细胞毒性指数逐渐增高. 结论 AFB1 染毒浓度大于80 mg/L时,对L-02细胞有显著毒性作用.
