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OPIDN致鸡大脑脑型肌酸激酶差异表达
目的 探讨有机磷化合物致迟发性神经毒性(OPIDN)鸡脑组织中脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)表达变化.方法 罗曼鹤母鸡24只,随机分成三磷甲苯磷酸酯(TOCP)染毒组(1 000 mg/kg)、苯甲基磺酰氟(PMSF)干预组(在染毒之前给予40 mg/kg PMSF)和对照组(生理盐水),每组8只.染毒第5和第21天,每组分别处死8只动物,分离大脑,提取总蛋白;用双向电泳和质谱分析技术,筛选相关差异表达蛋白.结果 蛋白双向电泳结果显示,在染毒第5天,TOCP组与对照组、PMSF干预组与对照组的CK-BB蛋白点灰度比值分别为0.858 3和0.913 3,各组间差异无统计学意义(P＞0.05);染毒第21天,TOCP组和PMSF干预组与对照组差异蛋白点CK-BB灰度比值分别为0.327 5与0.675 7,前者表达下调达3.0倍;对该蛋白点的质谱分析结果在Swiss-por数据库中进行比对,其与鸡种属、蛋白序列号为gi |45384340的creatine kinase B-type(CK-BB)蛋白的肽段匹配数为26,序列覆盖率为75％,评分值为1 603(可信度高),显示该蛋白点即为CK-BB蛋白.结论 OPIDN可致鸡大脑组织CK-BB蛋白表达显著下调,其变化可能与OPIDN模型动物神经组织损伤有关.
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PMSF对TOCP暴露鸡腰髓组织蛋白表达谱影响
目的 从三邻甲苯磷酸酯(TOCP)暴露鸡的腰髓组织中筛选迟发性神经毒性(OPIDN)相关差异表达蛋白点,为进一步质谱分析提供依据.方法成年罗曼鹤母鸡24只,随机分成1 000 mg/kg TOCP组,先给40 mg/kg苯甲基磺酰氟(PMSF)后24h再投1 000 mg/kg TOCP组(PMSF干预组)和给予生理盐水的对照组,每组8只.染毒后5d天处死动物,分离腰髓后提取总蛋白；通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱,运用图像分析软件(Im-ageMaster2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析.结果根据PMSF的作用特点,在TOCP组中选择与对照组比较差异有统计学意义,与PMSF干预组差异无统计学意义的蛋白匹配点,共获得上调点23个,下调点113个,其中＞4倍的上调点9个,＞4倍的下调点11个.结论TOCP暴露鸡腰髓组织中9个上调点和11个下调点的差异表达蛋白与其迟发性神经毒性可能密切相关.
