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人转化生长因子β1(TGF-β1)文献资料
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TGF-β1和TGF-βⅡ型受体酵母表达载体构建
目的 克隆人转化生长因子β1(TGF-p1)和4个受体基因片段,构建酵母表达载体,为应用酵母双杂交筛选与TGF-βl相互作用的TβRⅡ区域提供技术支持.方法 提取人血液中RNA,逆转录转为cDNA,PCR扩增TGF-β1和4个受体(TβRⅡ-A、TβRⅡ-B、TβRⅡ-C、TβRⅡ-D)基因片段,双酶切后,分别插入酵母双杂交表达载体pGBKT7和pGADT7;经过PCR扩增、双酶切和DNA测序鉴定后,构建质粒pGBKT7-TGF-β1和pGADT7-TβRⅡ-A、pGADT7-TβRⅡ-B、pGADT7-TβRⅡ-C和pGADT7-TβRⅡ-D.结果 成功扩增TGF-βl基因(1 200 bp)和TβRⅡ-A(453 bp)、TβRⅡ-B (366 bp)、TβRⅡ-C (276 bp)和TβRⅡ-D(165 bp)基因片段,经PCR、双酶切和DNA测序鉴定插入到酵母双杂交载体序列正确.结论 成功构建pGBKT7-TGF-β1和pGADT7-TβRⅡ-A、pGADT7-TβRⅡ-B、pGADT7-TβRⅡ-C和pGADT7-TβRⅡ-D酵母双杂交表达载体.
