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硫酸锌对UVB致HaCaT细胞损伤的拮抗作用
目的:探讨中波紫外线(UVB)造成HaCaT细胞损伤的机制及硫酸锌能否拮抗UVB对细胞的损害作用,为开发预防UVB损伤的药物提供理论依据.方法:将HaCaT细胞随机分为对照组、UVB组、加锌(Zn)组和Zn+ UVB组.对照组不施加任何处理因素；UVB组细胞进行UVB照射；Zn组只加入终浓度为50 μmol·L-的硫酸锌；Zn+ UVB组,加入硫酸锌24 h后,进行UVB照射.UVB照射时间为6 min,照射后24 h,收集各组细胞,采用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,TBA显色法检测细胞内丙二醛(MDA)水平,单细胞凝胶电泳技术检测各组细胞DNA的损伤情况.结果:与对照组比较,UVB组和Zn+ UVB组HaCaT细胞存活率显著降低(P＜0.05),MDA水平显著升高(P＜0.05)；与UVB组比较,Zn+ UVB组细胞存活率显著升高(P＜0.05),MDA水平显著降低(P＜0.05).单细胞凝胶电泳检测结果显示,UVB组和Zn+ UVB组HaCaT细胞均出现彗星样拖尾现象.与对照组比较,UVB组和Zn+ UVB组细胞尾部DNA尾距、Olive尾距显著增大(P＜0.05)；与UVB组比较,Zn+UVB组尾距、Olive尾距显著减小,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:UVB能够导致HaCaT细胞存活率下降和MDA水平提高以及DNA损伤,而硫酸锌能够拮抗UVB对HaCaT细胞的损伤作用.
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寻常型银屑病患者血清中IL-17的表达及紫草素对IL-17刺激HaCaT细胞分泌IL-6和IL-23的影响
目的:探讨寻常型银屑病患者血清中白细胞介素17 (IL-17)的表达水平及IL-17刺激后HaCaT细胞分泌白细胞介素6 (IL-6)和白细胞介素23 (IL-23)的变化,阐明其临床意义及紫草素的干预作用.方法:以25名正常对照者、29例寻常型银屑病患者和不同组别HaCaT细胞(空白对照组、IL-17刺激24 h组、IL-17刺激36 h组、IL-17刺激48 h组、紫草素+IL-17组、环孢素A+ IL-17组和IL-17组)为研究对象,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测寻常型银屑病患者血清IL-17水平和HaCaT细胞各组上清液中IL-6、IL-23水平;实时荧光免疫定量-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测各组HaCaT细胞中IL-6和IL-23 p19 mRNA表达水平;采用细胞计数盒-8 (CCK-8)法检测各组HaCaT细胞活力.结果:与正常对照组比较,银屑病组患者血清IL-17水平明显升高,以重度皮损银屑病组升高为明显(P＜0.05);IL-17刺激24、36和48 h组HaCaT细胞及其培养上清中IL-6和IL-23水平及其mRNA表达水平均高于空白对照组(P＜0.01);紫草素+IL-17组和环孢素A+IL 17组HaCaT细胞及其培养上清中IL-6和IL-23水平及其mRAN表达水平均低于IL-17组(P＜0.05).与空白对照组比较,其他各组细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).结论:银屑病患者血清IL-17表达水平升高,尤其是重度皮损银屑病患者血清IL-17表达水平升高明显,IL-17可促进HaCaT细胞分泌IL-6和IL-23,呈时间依赖性,紫草素可抑制IL-17的促炎症作用.
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参芩仿生化提取物对中波紫外线照射致生物体损伤的保护作用
目的 通过人参、黄芩仿生化提取物,对中波紫外线(UVB)照射致人永生化角质形成细胞(HaCaT)及小鼠皮肤损伤的保护作用进行研究,为中药抗辐射提供理论依据.方法 采用MTT法检测HaCaT细胞生存率,黄嘌呤氧化酶法检测细胞溶解液中及小鼠皮肤组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞溶解液中及小鼠皮肤组织匀浆中丙二醛(MDA)含量变化.结果 参芩仿生化提取物能够显著提高UVB照射损伤细胞的活性,明显升高细胞溶解液及小鼠皮肤组织匀浆中SOD活力,降低MDA含量.结论 参芩仿生化提取物对UVB辐射致HaCaT细胞和小鼠皮肤损伤均有明显的保护作用,能够有效的抵抗UVB所致的氧化损伤.
关键词： 人参 黄芩 提取物 HaCaT细胞 中波紫外线(UVB) 超氧化物歧化酶(SOD) -
乙酰化白藜芦醇对长波紫外线照射后HaCaT细胞内NRF2活化及活性氧水平的影响
目的 探讨乙酰化白藜芦醇对长波紫外线(UVA)照射后人永生化角质形成细胞HaCaT内核转录相关因子NRF2(NF-E2-related factors 2)活化和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响.方法 用CCK-8试剂盒检测不同剂量(0、5、10、20、30、40、60、80 J/cm2)UVA照射后24 h,及不同浓度(0、0.5、1、2μmol/L)乙酰化白藜芦醇干预24 h后再经20 J/cm2 UVA照射后24 h HaCaT细胞的存活率;Western blot检测20 J/cm2 UVA照射HaCaT细胞后不同时间点(0、3、6、12、24、48 h)及2μmol/L乙酰化白藜芦醇干预24 h后再经20J/cm2UVA照射后6h细胞核内NRF2蛋白表达的变化;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测2μmol/L乙酰化白藜芦醇干预HaCaT细胞24 h后再经20 J/cm2 UVA照射后24 h细胞的凋亡率和死亡率;二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记细胞检测HaCaT细胞中ROS水平的变化.结果 10～ 80 J/cm2UVA照射后24 h,HaCaT细胞存活率随照射剂量的增加逐渐降低(P＜0.05);20 J/cm2 UVA照射HaCaT细胞后0h,细胞核内NRF2的表达急剧增强(P＜0.01),照射后3～48h又逐渐减弱(P＜0.05).乙酰化白藜芦醇预处理能显著提高UVA照射后细胞的存活率(P＜0.05),降低其凋亡率和死亡率(P＜0.05),促进细胞核内NRF2蛋白的表达(P＜0.01),并降低细胞内ROS水平(P＜0.01).结论 乙酰化白藜芦醇能减轻UVA照射引起的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡,其机制可能与其促进NRF2蛋白活化,降低细胞内ROS水平,从而减轻UVA照射对细胞的氧化损伤有关.
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杜仲对紫外线诱导的人皮肤角质形成细胞光老化模型的影响
目的:考查杜仲乙醇提取物对人皮肤角质形成细胞光老化模型的影响,探讨杜仲抗皮肤衰老的作用和机理.方法:UVB照射HaCaT细胞建立光老化细胞模型,用不同浓度的杜仲乙醇提取物进行干预,以倒置显微镜观察细胞形态,使用MTT法检测细胞活性,以细胞培养液中LDH活性为指标评价细胞膜的损伤程度.结果:UVB照射后明显引发HaCaT细胞光老化反应,经50μg·mL-1和100μg·mL-1杜仲乙醇提取物干预后,细胞形态发生改善,细胞活性显著提高,分别为63.52%(P＜0.01)和62.53%(P＜0.05),培养液中LDH活性显著下降,分别为2547U·L-1(P＜0.01)和(2665±87.73)U·L-1(P＜0.05).结论:杜仲乙醇提取物可以减轻UVB诱导HaCaT细胞的光损伤,佳作用浓度为50μg·mL-1,作用机制可能与其能够清除氧自由基、提高细胞活性、保护细胞膜免受损伤而降低LDH的泄漏有关.杜仲具有抗皮肤衰老的潜力.
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甘草酸对光老化HaCaT细胞的保护作用及炎症因子影响
目的:研究甘草酸对UVB光老化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及炎症因子影响.方法:采用30 mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型;用10-7、10-6、10-5 mol/L甘草酸处理光老化细胞24 h.MIT法检测细胞增殖率;采用试剂盒检测各组细胞SOD、GSH及CAT活性;Western Blot法检测各组细胞IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量.结果:与空白组相比,模型组GSH、SOD及CAT活性显著降低(P＜0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著升高(P＜0.01);与模型组相比,不同浓度甘草酸可使SOD、GSH及CAT活性显著升高(P＜0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:甘草酸能保护UVB诱导的HaCaT细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,减少炎症因子的产生有关.
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甘油三酯代谢对紫外线照射后HaCaT细胞的影响及机制研究
目的:研究甘油三酯代谢过程对紫外线照射后HaCaT细胞的影响及机制研究.方法:HaCaT细胞分为4组,分别为对照组、紫外线照射组、紫外线照射并予甘油三酯组、紫外线照射并予甘油三酯合成酶抑制剂TOFA组,查看MMP-1、COX-2和IL-1β在mRNA及蛋白水平上的变化,并查看其上游转录因子NF-κ B/Iκ B的表达情况.结果:1)甘油三酯可以抑制紫外线照射后细胞外基质溶解蛋白MMP-1的表达(P＜0.05).2)甘油三酯可以抑制紫外线照射后炎症相关蛋白COX-2和IL-1β的表达(P＜0.05).3)甘油三酯合成酶抑制剂TOFA可以增强外线照射后细胞外基质溶解蛋白MMP-1以及炎症相关蛋白COX-2和IL-1β的表达(P＜0.05).4)其调节过程可能通过NF-κB/IκB信号传导通路实现(P＜0.05).结论:甘油三酯对紫外线的照射后的HaCaT细胞有保护作用,若抑制其代谢将减弱其保护作用.
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他克莫司对HaCaT细胞NF-kB表达的影响
目的:探讨他克莫司对HaCaT细胞中NF-kB分子表达的影响.方法:培养人HaCaT细胞,分别与10 μ mol.l-1和50 μ mol.l-1他克莫司溶液共孵育后,通过RT-PCR和Western-blot方法,分别从基因和蛋白水平,观察NF-kB分子表达的变化.结果:经10 μ mol.l-1和50 μ mol.l-1的他克莫司(FK506)溶液孵育后,HaCaT细胞中NF-kB分子表达明显低于对照组,同时体现一定的剂量效应,50 μ mol.l-1组的表达水平更低.结论:他克莫司可以剂量依赖性地抑制HaCaT细胞中NF-kB的分子表达.
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腺病毒介导的Wnt10b对HaCaT细胞迁移的作用及机制
目的:探讨Wnt 10b对HaCaT表皮细胞迁移的影响及机制.方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt 10b感染HaCaT表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt 10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录经Wnt10b处理后,HaCaT细胞体外迁移功能的改变;进一步采用Westen blot技术检测不同腺病毒处理后,HaCaT细胞中Wnt信号关键分子β-catenin、细胞粘附分子E-cadherin表达的改变情况.结果:①Ad-GFP-Wnt 10b感染HaCaT细胞48 h后,细胞内GFP表达上调,细胞免疫荧光染色显示Wnt 10b处理组高表达Wnt1 0b蛋白;②HaCaT细胞经Ad-GFP-Wnt 10b处理后,细胞创面愈合速度明显增快;③Wnt 10b处理组细胞β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而E-cadherin蛋白表达水平显著低于对照组.结论:Wnt 10b能促进HaCaT细胞迁移,且该效应涉及经典Wnt/β-catenin信号的激活及由E-cadherin介导的细胞粘附性的减弱.
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桃叶珊瑚苷对光损伤HaCaT细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3表达的影响
目的:探讨桃叶珊瑚苷对紫外线B诱导的HaCaT细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响,进一步阐明桃叶珊瑚苷抗光老化的作用机制.方法:将指数生长期HaCaT细胞随机分为正常对照组、模型对照组、10-7、10-6、10-5 mo1·L-1 AU处理组,采用64 mnJ·cm-2的UVB照射建立细胞光损伤模型,以终浓度10-4、10-6、10-5 mol·L-1 AU处理光损伤细胞,试剂盒检测ROS含量、Caspase-3活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量.结果:UV照射的HaCaT细胞ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3活性、Bcl-2、Bax蛋白表达量均升高口(P＜0.01),Bcl-2/Bax值降低(P＜0.01);不同浓度桃叶珊瑚苷处理后,ROS含量、Caspase-3活性、Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax值升高,10-6、10-5 mol·L-1桃叶珊瑚苷组与模型对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05,0.01).结论:桃叶珊瑚苷通过清除ROS,下调Bax、Caspase-3表达,上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,保护受损的HaCaT细胞,拮抗光老化.
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长期低剂量亚砷酸钠对永生化人皮肤角质形成细胞凋亡的影响
目的 观察1.0 μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)长期作用于永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)时,细胞凋亡及凋亡相关蛋白的动态变化.方法 用1.0 μmol/L NaAsO2长期作用HaCaT细胞成功建立恶性转化模型,收集细胞恶性转化模型建立过程中0、1、7、14、21、28、35代细胞.采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白,包括活化的半胱氨酸蛋白酶3、8(cleaved-caspase-3、8)、转录因子C/EBP的同源蛋白(Chop)、淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax).结果 随着染砷代数的增加,细胞凋亡率呈明显的下降趋势,各代数间比较差异有统计学意义(F=26.770,P＜0.05),其中染砷第7、14、21、28、35代细胞的凋亡率(0.307±0.049、0.213±0.055、0.163±0.057、0.147±0.035、0.053±0.012)低于对照组0代(0.393±0.021,P均＜0.05).染砷组促凋亡的cleaved-caspase-3、Chop、Bax蛋白和抗凋亡的Bcl-2蛋白表达各代间比较,差异有统计学意义(cleaved-caspase-3;1.000±0.000、1.030±0.027、1.104±0.069、1.016±0.087、0.838±0.075、0.753±0.082、0.677±0.073;Chop:1.000±0.000、1.059±0.018、0.934±0.095、0.976±0.216、0.793±0.136、0.651±0.042、0.564±0.056;Bax:1.000±0.000、1.069±0.037、1.028±0.042、0.954±0.118、0.641±0.135、0.531±0.132、0.429±0.085;Bcl-2:1.000±0.000、1.072±0.023、1.249±0.134、1.334±0.143、1.633±0.221、1.507±0.152、1.461±0.145,F=7.730、7.355、27.802、12.438,P均＜0.05),且21代及以后与对照组0代(1.000±0.000)和同代对照组(1.000±0.000)比较,差异有统计学意义(P均＜0.05);而cleaved-caspase-8蛋白各代间比较,差异无统计学意义(F=0.832,P＞0.05).结论 低剂量NaAsO2可能通过作用于线粒体和内质网凋亡通路抑制HaCaT细胞的正常凋亡而使其发生恶性转化.
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神经生长因子对HaCaT细胞增殖及表达趋化因子RANTES的影响
目的:研究神经生长因子(NGF)对HaCaT细胞增殖及表达趋化因子RANTES的影响,探讨NGF与银屑病表皮过度增殖及皮损局部大量T细胞浸润的关系.方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用NGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的NGF对HaCaT细胞增殖率的影响,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中表达的趋化因子RANTES.结果:MTT实验表明,NGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.962,P＜0.05);NGF能够诱导HaCaT细胞表达高水平的趋化因子RANTES(P＜0.001,Student's t-test),且呈浓度依赖性.结论:NGF具有显著的促进HaCaT细胞增殖及表达趋化因子RANTES的作用,银屑病皮损区域NGF表达增加可能是引起表皮过度增殖及皮损局部大量T细胞浸润的重要因素.
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亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞MGMT基因组蛋白乙酰化及转录与表达的影响
[目的]了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因组蛋白乙酰化调控、mRNA转录及蛋白表达的影响.[方法]以25.00、12.50、6.25、3.13μmol/LNaAsO2重复间隔处理HaCaT细胞72h(NaAsO2处理24h,隔天再次用NaAsO2进行相同的处理,重复处理3次).定量染色质免疫沉淀技术(Q-ChIP)检测MGMT基因转录调控区(CHIP1、CHIP2区域)及MGMT基因编码区(CHIP3区域,对照区域)组蛋白乙酰化修饰水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)和免疫印迹分析分别检测MGMT基因的mRNA转录和蛋白表达.设不染毒的HaCaT细胞为空白对照(0.00μmol/L),人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照.[结果]0.00、3.13、6.25、12.50、25.00μmol/L NaAsO2处理细胞中,MGMT基因转录调控区CHIP1区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为176.68±8.50、175.71±18.14、161.26±16.28、146.23±24.00和82.64±33.87,差异有统计学意义(F=28.809,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为183.59±11.98、180.84±24.10、166.52±5.48、156.87±10.64和103.42±7.04,差异有统计学意义(F=36.493,P<0.05).CHIP2区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为171.11±16.54、167.55±8.97、156.51±8.59、135.88±16.55和82.01±3.96,差异有统计学意义(F=49.626,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为117.23±16.21、143.29±10.59、135.87±7.44、105.48±7.56和78.79±6.92,差异有统计学意义(F=25.438,P<0.05).编码区CHIP3区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为37.53±6.23、35.57±5.85、40.81±4.45、42.18±1.23和41.87±5.71,差异无统计学意义(F=2.341,P>0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为40.78±2.42、38.56±4.66、39.47±2.88、33.13±3.48和31.48±4.99,差异无统计学意义(F=3.027,P>0.05).MGMT基因mRNA转录相对表达量分别为1.19829±0.15997、1.518 31±0.18054、1.42522±0.18039、1.01454±0.09679和0.88772±0.02000,差异有统计学意义(F=37.359,P<0.05):MGMT蛋白相对表达量分别为1.06619±0.061 24、1.17447±0.06475、0.848 83±0.05701、0.47163±0.02334和0.24034±0.01443,差异有统计学意义(F=20.687,P<0.05).[结论]砷通过导致MGMT基因转录调控区组蛋白去乙酰化,抑制MGMT基因mRNA转录及蛋白表达,是砷致皮肤损害的重要机制之一.
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组蛋白H4K20甲基化修饰对砷致HaCaT细胞DNA双键断裂损伤的影响
[目的]观察亚砷酸钠(NaAsO2)对人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)DNA双链断裂损伤、组蛋白H4第20位赖氨酸一、二甲基化(H4K20me1、H4K20me2)修饰水平的影响,探讨H4K20me1、H4K20me2修饰在砷致DNA双键断裂损伤中的作用.[方法]体外常规培养HaCaT细胞,以0.00、1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L NaAsO2连续处理HaCaT细胞24h,10.00 μmol/LNaAsO2处理HaCaT细胞0、6、12、24h,其中以0.00 μmol/L浓度组和0h为空白对照组.采用中性单细胞凝胶电泳法检测各组HaCaT细胞DNA双链断裂损伤水平(尾部DNA百分含量、Olive尾矩);免疫印迹法检测各组H4K20me1、H4K20me2蛋白表达水平.[结果] HaCaT细胞染砷24h后,DNA双链断裂程度在5.00、10.00 μmol/L浓度组高于对照组(P＜0.05);H4K20me1/me2蛋白表达水平在2.50、5.00、10.00 μmol/L浓度组低于对照组(P＜0.05).10.00 μmol/LNaAsO2处理HaCaT细胞0、6、12和24h后,DNA双链断裂程度在12、24h染砷组高于对照组(P＜0.05),H4K20me1、H4K20me2蛋白表达水平在6、12、24h较对照组降低(P＜0.05).尾部DNA百分含量与H4K20me1、H4K20me2修饰水平呈负相关(r=-0.955、-0.855,均P＜0.05),Olive尾矩与二者亦呈负相关(r=-0.940、-0.841,均P＜0.05).[结论]砷可导致HaCaT细胞DNA双键断裂损伤和H4K20me1、H4K20me2表达改变,提示砷所致DNA损伤可能与组蛋白H4K20甲基化修饰有关.
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混合砷对Keap1抑制细胞Keap1/Nrf2-ARE和MAPK/ERK信号通路的影响
[目的]探究混合砷染毒对Keap1抑制的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)Keap1/Nrf2-ARE和MAPK/ERK信号通路的影响及对NF-κB基因表达的影响.[方法]细胞培养72h,分为空白对照组(正常HaCaT细胞未染砷组)、阴性对照组(Keap1基因抑制且未染砷组)和3个Keap1基因抑制且混合砷染毒组,混合砷染毒浓度为2.9、5.8、29.0 unol/L;采用MTT法测定细胞生长情况;采用实时荧光定量PCR法测定HaCaT细胞Keap1、Nrf2、ERK、NF-κB的mRNA表达水平.[结果]混合砷染毒组与阴性对照组的细胞活力相比,差异具有统计学意义(F=483.9,P＜0.05).中、高浓度砷染毒组细胞活性受抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).混合砷染毒组与阴性对照组的Keap1 mRNA、Nrf2mRNA相比,差异具有统计学意义(F=5.73,P=0.012;F=318.56,P＜0.05).Nrf2mRNA表达呈低浓度时促进(P=0.038),中、高浓度砷染毒时抑制(P=0.014、P=0.016).混合砷染毒组与阴性对照组的ERK、NF-κBmRNA相比,差异具有统计学意义(F=39.88,P＜0.05;F=2 619.41,P＜0.05).低砷浓度染毒促进ERK基因表达(P=0.020),高砷浓度染毒则抑制其表达(P＝0.003),差异有统计学意义.NF-κB基因表达与阴性对照组相比,低、中砷浓度时促进(P＝0.030、P=0.032),高砷浓度时抑制(P=0.013),差异有统计学意义.[结论] Keap1抑制状况下,砷对HaCaT细胞中Nrf2、ERK和NF-κB基因表达呈低浓度时促进、高浓度时抑制的双向调节作用.
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红景天苷对中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的影响
目的:探讨红景天苷对中波紫外线(UVB)诱导HaCaT细胞凋亡的影响及可能的分子机制.方法:将HaCaT细胞分为正常对照组、红景天苷处理组、UVB组和UVB+红景天苷组,先用UVB照射细胞,再用红景天苷处理HaCaT细胞24 h,Real-time PCR和免疫印迹分别检测caspase 3、caspase 12、前细胞凋亡因子(CHOP)的mRNA及蛋白表达;MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果:UVB处理组caspase 3、caspase 12、CHOP的mRNA和蛋白表达明显增加,红景天苷处理后明显降低.UVB+红景天苷组较UVB组细胞增殖显著增加,凋亡率减少23.22％.结论:红景天苷可通过抑制caspase 12、CHOP的表达,减少UVB引起的HaCaT细胞凋亡.
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Cyr61上调人角质形成细胞表达IL-36α的实验研究
银屑病是多种炎症因子参与的慢性炎症性皮肤疾病,其中IL-1家族分子IL-36α与银屑病发生发展密切相关.在基因敲除小鼠研究中发现,当敲除IL-36α基因后,再用咪喹莫特制备小鼠银屑病样模型时,皮损和炎症都明显减轻.我们前期研究发现促炎因子Cyr61/CCN1能通过活化角质细胞、促进趋化因子产生而加剧银屑病发生,但其是否也参与IL-36α表达与调控则未见报道.本研究采用人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes cell line,HaCaT cell)在体外研究Cyr61对IL-36α表达的调控作用.结果发现Cyr61能显著上调HaCaT细胞表达IL-36α,而且呈剂量依赖性.进一步通过siRNA干扰技术下调HaCaT细胞中Cyr61的内源性表达,发现当Cyr61表达受抑制后,IL-36α表达也被有效抑制,表明Cyr61能够介导角质细胞表达IL-36α.已有报道表明TNF-α、IL-17和IL-22能够上调角质细胞表达IL-36α,因此我们还采用TNF-α、IL-17和IL-22特异性siRNA干扰这些炎症因子的内源性表达,观察Cyr61对IL-36α的作用.结果表明这些因子被干扰后并不影响Cyr61对IL-36α表达的影响,说明Cyr61能直接促进IL-36α表达.本研究的结果提示Cyr61/CCN1还可能通过上调IL-1家族分子IL-36α而参与银屑病发生.
关键词： 银屑病 Cyr61/CCN1 IL-36α HaCaT细胞 -
Cyr61上调人角质形成细胞系表达趋化因子与银屑病发生机制初探
银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病,多种炎症细胞与炎症因子参与其发病.我们已有研究发现促炎因子Cyr61/CCN1通过活化角质细胞而加剧皮损,但是否还有其他促炎机制尚不清楚.本研究通过Cyr61介导角质细胞产生趋化因子的体外实验,探讨Cyr61参与银屑病发生新途径.采用Real-time PCR方法检测人角质形成细胞系(HaCat细胞)在外源性Cyr61作用下趋化因子的表达格局.实验结果显示Cyr61能够在体外促进人角质形成细胞系表达多种趋化因子(如CCL2,CCL17,CCL22,CXCL1,CXCL10,CXCL11 (P＜0.05)),提示Cyr61可能通过促进角质形成细胞系表达多种趋化因子从而参与DC,Th17,Th1等细胞的趋化.提示Cyr61可能通过促进角质形成细胞系表达趋化因子介导炎性细胞局部浸润增多,加剧银屑病发病.
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富组蛋白1促皮肤创伤愈合的细胞学研究
目的 了解富组蛋白1(histatin1,Hst1)对人表皮细胞(human adult skin keratinocytos,HaCaT)、人成纤维细胞株增殖和迁移功能的影响.方法 细胞增殖实验:(1)将HaCaT细胞、人成纤维细胞均分为空白对照组(1640/DMEM+1%新生牛血清)、Ⅰ组(100 μg/ml Hst1)、Ⅱ组(30 μg /ml Hst1)、Ⅲ组(3 μg/ml Hst1),比较两种细胞的增殖数量;(2)细胞划痕实验:将两种细胞分为空白对照组(1640+1%新生牛血清)、A组(30 μg/ml Hst1)、B组[10 ng/ml人重组表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)]、C组(30 μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF)、D组(15 μg/ml Hst1+5 ng/ml rhEGF)、E组(15 μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF),比较两种细胞体外创面愈合速度.结果 (1)3～100 μg/ml的Hst1 能够促进HaCaT增殖,72 h时Ⅰ组细胞数高于空白对照组、Ⅱ组及Ⅲ组(P＜0.01);3～100 μg/ml的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,24 h时Ⅰ、Ⅱ组细胞数高于其余各组(P＜0.01);(2)30 μg/ml Hst1能促进HaCaT细胞迁移,16 h时A组划痕愈合率高于空白对照组(P＜0.01),C、D组高于A组(P＜0.05);30 μg/ml Hst1能促进人成纤维细胞划痕创面愈合,与rhEGF联合应用时划痕愈合率高于单独用药.结论 Hst1能够促进HaCaT细胞和人成纤维细胞增殖和迁移,与rhEGF联合应用时对其促进体外创伤愈合具有协同作用.
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紫外线对角质形成细胞的细胞因子分泌的影响
目的观察紫外线(ultraviolet,UV)对体外培养的角质形成细胞株(HaCaT细胞)细胞因子分泌的影响.方法 UV照射佛泊脂和脂多糖(PMA/LPS)刺激的HaCaT细胞,用ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子IL-1α、IL-2、IL-6和IL-8的含量.结果正常HaCaT细胞有IL-1α、IL-2、IL-6和IL-8的自发性分泌.PMA和LPS刺激HaCaT细胞,其IL-1α分泌量下降(P＜0.05),IL-6和IL-8分泌量明显增加(P＜0.01).正常HaCaT细胞经UV照射,IL-1α、IL-2、IL-6的分泌无明显变化(P＞0.05),IL-8分泌量升高(P＜0.05).PMA和LPS刺激的HaCaT细胞经UV照射,其IL-1α、IL-6和IL-8的分泌量明显增加(P＜0.01).结论 UV对不同状态下HaCaT细胞的作用是不同的.
