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山冈橐吾碱clivorine致DNA损伤的研究
吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs)是一类天然的植物性毒素,目前已发现400多个不同结构的PAs,广泛存在于6 000多种高等植物中 [1-3].现有的研究普遍认为PAs在体内肝细胞色素P-450酶系代谢活化下形成吡咯代谢物(pyrrole metabolites),其具有很强的亲电能力,可与体内很多重要的细胞亲核体如DNA、RNA、酶和蛋白质等发生烷基化作用形成结合吡咯或与DNA交联而产生毒性[4-7].
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p38 MAP激酶在山冈橐吾碱肝细胞毒性中的作用
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAP 激酶 )在山冈橐吾碱肝细胞毒性中的作用.方法 采用Western杂交方法观察山冈橐吾碱(100 μmol·L-1,分别作用1,5,15,30及60 min)对p38MAP激酶激活的影响;10 μmol·L-1 p38MAP激酶抑制剂SKF86002 预处理15 min后,分别观察其对山冈橐吾碱(100 μmol·L-1)诱导p38MAP激酶磷酸化(30 min,Western杂交法)及细胞毒性(MTT法,36及48 h;台盼蓝染色法,36 h)的影响.结果 Western blot结果显示,100 μmol·L-1山冈橐吾碱明显诱导p38 MAP激酶的磷酸化激活,5～30 min时处于较高水平;SKF86002预处理可以明显抑制山冈橐吾碱诱导的p38 MAP激酶磷酸化;MTT染色法和台盼蓝染色实验均发现SKF86002预处理能部分降低山冈橐吾碱诱导的肝细胞毒性[MTT,36 h: (0.210±0.008) vs (0.170±0.003),48 h: (0.33±0.03) vs (0.200±0.003);台盼蓝染色(80±2)% vs (72±7)%;n=8,P＜0.05].结论 p38MAP激酶可能参与了山冈橐吾碱诱导的肝细胞毒性作用.
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山冈橐吾碱在雌性大鼠肝微粒体内的代谢
研究了山冈橐吾碱(clivorine)在雌性大鼠肝微粒体内的代谢. 山冈橐吾碱在雌性大鼠肝微粒体内的主要代谢物为两个非吡咯代谢物M1和M2. 与雄性大鼠不同,生成肝毒性的吡咯代谢物为其次要的代谢途径. 文献报道山冈橐吾碱在雄性大鼠肝微粒体内的主要代谢方式是形成相应的吡咯代谢物. 这提示山冈橐吾碱在雌雄大鼠肝微粒体内的主要代谢方式不同. CYP450特异性抑制剂黄胺苯吡唑(CYP2C), 毛果芸香碱(CYP2A1), 二乙基二硫代氨基甲酸钠(CYP2E1)和酮康唑(CYP3A)对M1和M2的形成无明显的影响. 黄素单氧化酶的特异性抑制剂甲巯咪唑可以显著地抑制M2的形成,但对M1的形成无明显的抑制作用,且M1在肝微粒体中的形成为NADPH非依赖性,上述结果提示参与M1和M2代谢的酶分别为肝微粒体中的水解酶和黄素单氧化酶. 另一方面,毛果芸香碱, 黄胺苯吡唑和二乙基二硫代氨基甲酸钠对山冈橐吾碱的吡咯代谢物的形成无明显的影响,而CYP3A的特异性抑制剂酮康唑可以显著地抑制吡咯代谢物的生成,且山冈橐吾碱在重组的大鼠肝CYP2C12, CYP2E1温孵液中无代谢,而在重组的大鼠肝CYP3A1和CYP3A2的温孵液中山冈橐吾碱被代谢成相应的吡咯代谢物. 这提示CYP3A作为主要的CYP450酶参与了山冈橐吾碱的肝毒性吡咯代谢物的形成. 山冈橐吾碱在雌雄大鼠体内的毒性差异可能与其在雌雄大鼠体内的代谢存在差异有关.
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人肝CYP3A参与了山冈橐吾碱的代谢及其肝毒性代谢物的形成(英)
目的在体外研究山冈橐吾碱在人肝微粒体内的代谢及参与其代谢的主要的CYP450酶,探讨其代谢致毒机理.方法采用人肝微粒体研究山冈橐吾碱的主要代谢方式和代谢物.在体外运用CYP450酶的选择性抑制剂和cDNA表达的人肝CYP450酶,探讨其对山冈橐吾碱的代谢及肝毒性的吡咯代谢物形成的影响及参与山冈橐吾碱代谢的主要的CYP450酶.结果山冈橐吾碱在人肝微粒体内的主要代谢物为肝毒性的吡咯代谢物:去氢倒千里光裂碱, 7-谷胱甘肽基-去氢倒千里光裂碱,7,9-二谷胱甘肽基去氢倒千里光裂碱和山冈囊吾酸.CYP450特异性抑制剂α-萘黄酮(抑制CYP1A2)、黄胺苯吡唑(抑制CYP2C)、奎尼丁(抑制CYP2D6)和二乙基二硫代氨基甲酸钠(抑制CYP2E1)对山冈橐吾碱的代谢无明显的影响.但CYP3A的特异性抑制剂酮康唑和三乙酰竹桃霉素可以显著地抑制山冈橐吾碱的代谢及其吡咯代谢物和结合型吡咯物的形成.此外,在cDNA表达的人肝CYP3A4的温孵液中,山冈橐吾碱被代谢成相应的吡咯代谢物,而山冈橐吾碱在cDNA表达的人肝CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6和CYP2E1温孵液中无代谢.结论山冈橐吾碱在人肝微粒体内的主要代谢方式是形成肝毒性吡咯代谢物,CYP3A作为主要的CYP450酶参与了山冈橐吾碱的代谢及其肝毒性吡咯代谢物的形成.CYP3A在山冈橐吾碱所致的肝毒性中发挥了重要的作用.
