TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测腹地病毒方法的建立
摘要： 为建立特异、快速、灵敏的TaqMan荧光定量RT-PCR方法用于腹地病毒核酸检测,利用腹地病毒核衣壳蛋白编码基因的特异性序列设计引物和探针,建立荧光定量RT-PCR快速检测体系.对含有目的基因的质粒、80份发热伴血小板减少综合征病毒阳性血清样本以及80份流行性出血热病毒阳性鼠肺样本进行核酸检测,验证方法的灵敏度、特异度和重复性.结果显示,该方法所检测的80份发热伴血小板减少综合征病毒核酸阳性血清与80份流行性出血热病毒阳性鼠肺样本均为阴性,对目的基因的检测灵敏度达50拷贝/反应;重复性测试中的变异系数为0.09％-0.87％,从样本核酸提取至检测完成的全过程仅需2h.证明建立的腹地病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法具有快速、特异、灵敏及重复性好的特点,有助于进口货物中昆虫、啮齿类动物、外轮上工作的疑似病人检疫以及对腹地病毒流行病学监测工作的开展.
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极性碳纳米管涂层的制备及在测定芳香胺类化合物中的应用
制备了羟基修饰的多壁碳纳米管涂层并成功应用于5种芳香胺化合物的测定中.羟基修饰的多壁碳纳米管通过酚醛树脂固定于不锈钢丝表面制得萃取纤维,顶空萃取分析物,然后在GC-MS进样口解吸后分离测定.考察萃取时间、解吸时间、萃取温度、解析温度和盐度对萃取效率的影响.新涂层比商用的PDMS涂层有更高的富集倍数和灵敏度,6次平行测定的RSD为4.3-7.0%,线性范围10-100000 ng/L.利用该方法测定了废水样品中的芳香胺化合物的含量,加标回收达到75.4-106%.
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腹泻性贝毒毒素的高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法研究
建立了腹泻性贝毒毒素( DSP)4种代表性化合物米氏裸甲藻毒素(GYM)、螺环内酯毒素1( SPX1)、软海绵酸毒素(OA)和蛤毒素2(PTX2)的高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC - ESI - MS/MS)检测方法.以80%甲醇水溶液对贝类组织中的毒素进行提取,再以亲水亲脂平衡柱(HLB)对提取液进行净化,后以高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定.DSP4种代表性化合物在各自浓度范围内线性良好,回收率为77.2%-89.6%,精密度为5.6%-11.1%.GYM、SPX1、OA和PTX2的检测低限分别为0.50、0.71、14.25和0.86 μg/kg.
关键词： 海洋贝类 腹泻性贝毒毒素 高效液相色谱-电喷雾串联质谱 -
快速液相色谱法测定食品中17种邻苯二甲酸酯类化合物
利用核壳型快速分析色谱柱(表面多孔层填料,Poroshell),建立了食品中17种邻苯二甲酸酯类化合物的快速液相分析检测方法.该方法整个分析过程小于15nun,可在基层实验室普及的常规液相色谱仪上实现,具有较强的实用性和可操作性,适用于暂时还不具有质谱系统的实验室使用.
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霍乱弧菌检测及快速分型方法的建立
应用PCR结合变性高校液相色谱技术建立食品中霍乱弧菌检测及快速分型的新方法.根据霍乱弧菌外膜蛋白基因序列的特点、O群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌特异性基因序列设计特异性引物,进行单重PCR和复合PCR扩增,产物经DHPLC技术进行检测和快速分型.该PCR-DHPLC检测方法可以用于快速、准确地鉴定细菌培养物是否为霍乱弧菌以及具体的菌群菌,这是霍乱弧茵分型检测的新技术和新方法.
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气相色谱-负化学源质谱法测定花生中六六六和啶虫丙醚农药残留
建立了花生中六六六和啶虫丙醚的气相色谱-负化学离子源质谱检测方法.样品先采用乙腈均质提取,正己烷初步脱脂后,过PSA/SAX固相萃取小柱净化,用GC/NCI/MS在选择离子监测模式下测定.实验所得的平均回收率为80%-105%;RSD不大干11.7%;并与EI方法进行比较,灵敏度分别是EI方法的42倍和27倍.
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氟喹诺酮类药物的高能诱导裂解高分辨质谱解析
利用LTQ-Orbitrap XL线性离子阱-轨道离子阱高分辨组合式质谱仪的高能裂解反应池及高分辨质谱技术,获取了八种氟喹诺酮类药物的正离子模式下高分辨质谱碎片信息,阐述了其在高能诱导裂解条件下的裂解规律:喹诺酮母核具有较高的稳定性,裂解反应主要发生在羧基及哌嗪环.HCD裂解模式能有效改善CID裂解中产生的低质量碎片丢失(cut-off)效应,可为氟喹诺酮类化合物的结构解析和确证提供更全面的质谱信息.
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卷心菜菌相特征及生食安全性研究
检测卷心菜各层细菌、霉菌、酵母菌、乳酸菌总数,并首次采用基因组DNA提取、16SrRNA序列的PCR扩增、PCR产物直接测序及序列对比分析等手段研究卷心菜微生物茵相特征.结果表明,卷心菜由里到外细菌总数逐层下降,但各层均存有细菌,共发现6种菌株,未发现致病性细菌.霉菌总数、乳酸菌总数显示,卷心菜去掉三层后一般不会受到外界致病菌的污染,食用安全性高.
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基于自组织竞争神经网络的入境船舶压载水细菌调查分析
采用培养、分离、鉴定的方法,调查山东主要港口入境船舶压载水中细菌种类,发现多种致病菌.对74艘入境船舶压载水水样应用自组织竞争神经网络进行分类.分类结果表明,压载水的分类与入境港口或来源地均无关.
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气相色谱-质谱法同时测定腌制食品中的13种防腐剂
用气相色谱-质谱法同时测定腌制食品中的乙酸、丙酸、富马酸二甲酯、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)、山梨酸、脱氢乙酸、苯甲酸、叔丁基羟基茴香醚(BHA)、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、4-苯基苯酚等13种防腐剂剂,建立了一种简单、快速、准确的测定方法.样品以乙醚作为提取溶剂,饱和氯化钠溶液作为释放剂,提取后乙醚层经无水硫酸钠脱水干燥、过滤,旋转蒸发仪上浓缩至近干,定容后进行分析.采用程序升温,将13种防腐剂完全分离.13种防腐剂剂的平均回收率为87.5%-105.3% (n=7),检测限为0.10-0.46mg/kg,相对标准偏差为0.89%-4.81% (n=7).
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亚硫酸盐保鲜剂在对虾保鲜中的应用研究
为解决海捕虾易黑变、保鲜剂滥用及残留物超标等问题,以海捕对虾为研究对象,研究保鲜剂亚硫酸钠在不同浓度、不同pH值和不同浸泡时间处理对虾后,对虾在保藏过程中体内氧化三甲胺、三甲胺、二甲胺、SO2残留量及甲醛生成量的变化规律.确立了佳的对虾保鲜工艺条件(亚硫酸氢钠为6g/L,pH4.0).结果表明:该条件能有效抑制对虾的黑变,处理后的虾体中SO2及甲醛的残留量低于国标限量,该方法具有良好的推广应用前景.
