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钙激活氯离子通道在气道杯状细胞合成黏蛋白中的促进作用

宋立强;戚好文;李妍;王吉村;林爱华

摘要: 目的: 探讨人激活Cl-通道I型(hCLCA1)在气道杯状细胞合成黏蛋白中的调控作用. 方法: 以人气道黏液上皮细胞系NCI-H292作为杯状细胞特性研究的体外模型,构建携带荧光蛋白标签的真核表达质粒pIRES2-EFGP/hCLCA1,转染NCI-H292细胞,用G418筛选稳定表达hCLCA1的细胞NCI-H292/hCLCA1. 对被转染细胞采用荧光显微镜和RT-PCR法检测hCLCA1 mRNA. 根据NFA(hCLCA1阻断剂)干预与否,将细胞分为4组: ① NCI-H292;② NCI-H292/hCLCA1;③ NCI-H292+NFA;④ NCI-H292/hCLCA1+NFA. MTT法检测各组细胞的增殖活性;PAS特染法检测各组细胞黏液糖蛋白的表达状况, RT-PCR法检测黏蛋白MUC5AC mRNA水平. 结果: 经过500g/L的G418筛选,证实获得NCI-H292/hCLCA1细胞. 对各组细胞检测结果表明,NCI-H292/hCLCA1细胞的增殖活性、黏液糖蛋白表达量及MUC5AC mRNA水平均显著高于亲本细胞,并且NFA能有效抑制NCI-H292/hCLCA1的这些生物活性改变. 结论: hCLCA1能有效促进气道杯状细胞的增殖能力及黏蛋白合成,早期阻断hCLCA1可能是哮喘防治的有效途径之一.

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