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卵巢癌 基因治疗 HSV-TK GM-CSF文献资料
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HSV-TK与GM-CSF基因双顺反子逆转录病毒载体转染卵巢癌细胞体外特性的研究
目的 探讨利用同一逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）自杀基因与细胞因子GM-CSF（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）基因同时转入卵巢癌细胞后目的基因的表达状况，为卵巢癌的免疫基因治疗提供实验基础。方法 利用IRES（内部核糖体进入位点）序列连接HSV-TK与GM-CSF基因，并将其置于逆转录病毒载体的LTR控制之下；通过乒乓转染法获得产病毒包装细胞PA317/TK-GM，并利用收集的病毒上清转染人卵巢癌细胞系SKOV3，经筛选获得阳性克隆SKOV3/TK-GM；经PCR及RT-PCR检测目的基因在细胞基因组中的整合及转录后，利用MTT法测定GCV对SKOV3/TK-GM细胞的杀伤活性并对TK-GCV系统中的旁观者效应进行观察，同时对转基因细胞分泌的GM-CSF进行ELISA分析。结果 构建的pLGM-I-TK双顺反子逆转录病毒载体可通过乒乓转染法导入包装细胞PA317中，且所分泌病毒滴度达8.6×105 cfu/ml；逆转录病毒感染SKOV3细胞后目的基因能够整合到基因组中并正常启动转录；SKOV3/TK-GM细胞可被GCV有效杀伤，IC50值为0.7 μg/ml，并存在旁观者效应；GM-CSF有蛋白水平的表达，ELISA法测定其分泌量为60.4 ng*ml-1*106细胞-1*2天-1。结论 IRES序列可用于逆转录病毒载体介导的HSV-TK和GM-CSF双基因对卵巢癌细胞的共转染，在自杀基因瘤苗的基础上，其分泌的细胞因子GM-CSF可作为进一步加强免疫细胞功能的手段。
