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人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7编码区序列变异研究
目的 获取人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列并进行变异分析,为新型分子诊断方法 的研发提供目标序列. 方法 通过导流杂交基因芯片技术获取人乳头瘤病毒16型感染宫颈脱落细胞.设计特异性引物,扩增人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析. 结果 通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞的分型检测,获得了人乳头瘤病毒16型感染阳性标本;选择其中3份阳性标本核酸为模板,通过特异性引物均成功扩增出大小介于750 bp 和1 000 bp之间的目的 序列;分别克隆到T载体上并测序,得到3条人乳头瘤病毒16型早表达基因E6/E7的编码区序列,克隆并测序后向GenBank核酸数据库提交获收录,登录号分别为EU869316、EU869317和EU869318;经BLAST分析,3条序列与GenBank序列PPH16(Accession: K02718)的E6/E7编码区序列一致性均为99%,且存在8种碱基置换,其中4种为同义突变,另4种则可引起所编码的相应氨基酸残基改变. 结论 本研究得到了与HPV高危型16型PPH16高度相似的E6/E7编码序列,为HPV致病机制和新型分子检测方法 研究奠定了基础.