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过碘酸盐改良法文献资料
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两种不同制备酶标记结合物方法的比较
①目的对过碘酸盐经典法(经典法)和过碘酸盐改良法(改良法)制备的酶标记结合物进行比较.②方法两种方法均用过碘酸盐氧化辣根过氧化物酶(HRP)使醛基暴露以提高酶与抗体(或抗原)的结合率.但在用NaIO4氧化前应将酶蛋白分子上的氨基进行处理,以防酶经氧化后形成醛基造成自身交联,为此,经典法是用二硝基氟苯将氨基封闭,而改良法是在低pH条件下用NaIO4直接氧化HRP.用二硝基氟苯封闭仍有35%的HRP发生自身交联,而且酶的活性受影响.而改良法在低pH条件下直接氧化HRP,仅5%HRP有自身交联而且活性不受影响.我们用上述方法分别制备了两种酶结合物,并对两种酶结合物作了质量对比试验,包括对流电泳、酶活性测定.③结果改良法酶结合物活性及产率明显比经典法高.④结论过碘酸盐改良法制备的酶结合物活性及产率均较过碘酸盐经典法好.
