首页 > 文献资料
-
非标记液质联用蛋白组分析中国实验小型猪冠心病模型的方法研究
目的:针对中国实验小型猪冠心病模型,建立非标记液相色谱/质谱联用血清蛋白组学研究方法.方法:研究中分别设立健康对照组、模型组、阳性药物治疗组及中药治疗组,分析过程中,样品未进行高丰度蛋白去除,利用BCA法测定蛋白浓度后,直接使用-20℃冷丙酮冰上沉淀,4℃放置过夜,离心,弃去溶液,对蛋白沉淀,分两步加入Trypsin进行酶解处理,加酸终止后,离心,获取上清液进行分析.测定方法采用160nl Trap柱进行蛋白富集,分析柱采用Agilent Chip(C<,18>,150mm×75μm),为获得较高的蛋白覆盖率,方法进行了如下优化:测定梯度优化在97％水相-77％水相区间；线性梯度运行时间为125min；Data dependent参数优化；2次重复进样等.测定结果利用Agilent Spectral mill进行搜索,部分蛋白利用Mascot进行了验证搜索.结果:终在健康对照组获得特异性蛋白512个(unique protein),重叠蛋白47个(overlapped).以获得的健康组特异性蛋白为参照,对4组来源样品进行了PCA分析,将上述各组进行分类,其中模型组与治疗组得到了明显的区分,中药治疗组与阳性药组有着相似的变化轨迹,但与健康组区分明显,这说明实验中大部分冠心病的损伤存在很大程度的不可逆性,药物治疗仅对其中部分蛋白有着转归趋势,例如对其中纤维蛋白原,有着明显的下调趋势.研究还针对主要的蛋白进行了功能分类,相对识别了模型组与健康组、模型组与治疗组；治疗组与健康组之间的蛋白上调及下调趋势,其功能主要集中在脂质代谢相关的蛋白,如Apoliprotein,HAS,及C反应蛋白.结论:方法证明了利用非标记蛋白鉴定技术,可以较好地评价出动物模型的变化,同时可以在一定程度上反映出治疗的转归方向.
关键词： 中国实验小型猪 蛋白组学 冠心病 非标记液相色谱/质谱联用
