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mutA文献资料
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变形链球菌CH43变链素Ⅰ基因片段的克隆及表达
目的:获得编码变形链球菌CH43变链素Ⅰ前体肽基因片段,并诱导其在不杀伤工程菌的前提下高效表达.方法:用PCR技术从变形链球菌CH43基因库中扩增出编码变链素Ⅰ成熟肽mutA基因片段相应大小的DNA片段,将片段与pMD18-T 载体连接后测序.将测序正确的mutA按照BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点克隆入原核表达载体pProEX,将连接产物转化入E.coli DH5α,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His 融合蛋白.以IPTG浓度、A600值、诱导时间各梯度优化表达.结果:PCR 获得的mutA序列与GenBank报道的一致(为147 bp).优化了诱导条件使重组载体在E.coli DH5α中高效表达,融合蛋白经SDS-PAGE,在相对分子质量为5.7×103 处有特异的蛋白条带,在A600为1.666时,加入IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,诱导6 h,目的蛋白表达量高,占菌体总蛋白量的20%左右.结论:成功克隆变形链球菌CH43变链素ⅠmutA基因片段,并在E.coli DH5α中高效表达.
