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Nurr1 SK-N-SH细胞 基因转染 TH 分化文献资料
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外源性Nurr1基因过表达对SK-N-SH细胞分化作用的研究
为研究外源性Nurr1基因过表达对转染细胞的作用,探讨Nurr1基因调控多巴胺能神经元分化的机制.本研究应用:(1)pBK-RSV-Nurr1质粒经脂质体法转染SK-N-SH细胞,G418筛选;用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测基因转染细胞Nurr1mRNA及Nurr1蛋白的表达;(2)all-trans-RA、9-cis-RA、forskolin诱导基因转染细胞,RT-PCR及免疫荧光细胞化学方法检测基因转染细胞MAP2和TH的表达.结果显示:(1)经RT-PCR检测,基因转染细胞表达Nurr1 mRNA;免疫细胞化学染色结果显示基因转染细胞表达Nurr1蛋白,说明外源性Nurr1基因在转染细胞内过表达;基因转染细胞形态与正常细胞相比没有明显变化,生长速度略有降低并表达成熟神经元的特异性标识物MAP2,但不表达多巴胺能神经元的特异性标识物TH.(2)尽管RA、forskolin诱导可促进Nurr1基因转染的SK-N-SH细胞进一步向成熟神经元分化,但不能诱导基因转染细胞表达TH.结论:单纯的Nurr1过表达可以促进SK-N-SH细胞向成熟神经元方向分化,但不足以激活TH基因转录.TH基因的转录激活还需要除Nurr1以外的其它细胞(或神经元)的环境或因子的共同作用.
