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重组构建文献资料
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小鼠酪氨酸羟化酶启动子克隆
为了克隆小鼠酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)启动子,并对其特异性调控能力进行研究,本实验采用重叠延伸PCR高保真扩增出小鼠TH启动子片段,测序正确后,重组构建质粒,并用TH启动子调控EGFP基因的表达.然后分别转染MN-gD细胞(TH+)和ECV细胞(TH-),观察EGFP基因在细胞内表达情况.结果显示:扩增出小鼠TH启动子序列与GenBank报道一致;单酶切和质粒PCR鉴定证实小鼠TH启动子和EGFP基因已经克隆入重组质粒中;小鼠TH启动子能调控EGFP在MN-gD细胞中表达,不能调控EGFP在ECV细胞内表达.初步确定克隆的小鼠TH启动子具有特异性调控目的基因表达的能力.
