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基因 RT-PCR文献资料
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RT-PCR构建人甲胎蛋白全长基因真核表达载体
目的采用反转录PCR(RT-PCR)构建人甲胎蛋白(Alpha-Fetoprotein, AFP)全长基因真核表达载体,为下一步应用以AFP蛋白为靶点的基因治疗作准备.方法体外培养人肝癌细胞HepG2,Trizol裂解细胞,提取总mRNA.设计含有特定酶切位点BglⅡ,SalⅠ和真核启动元件Kozak序列的RT-PCT正反向引物,采用RT-PCR法克隆AFP全长cDNA,使用BglⅡ+SalⅠ双酶切载体pEGFP-C3载体和AFP cDNA,将AFP cDNA连接载体pEGFP-C3,构建新的真核表达载体,命名为pEGFP-AFP.结果通过测序证明pEGFP-AFP真核表达载体含有AFP全长基因.结论:本研究成功构建人甲胎蛋白基因真核表达载体pEGFP-AFP,为进一步的分子试验和基因治疗打下了基础.
