首页 > 文献资料
-
利用噬菌体肽库筛选与人CD59特异性结合的短肽
目的: 筛选并鉴定与人CD59分子特异结合的短肽, 为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽封条奠定基础.方法: 以高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞, 采用竞争结合试验, 对噬菌体随机12肽库进行5轮亲和筛选.用ELISA筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析.结果: 随机挑选的16个克隆中, 有8个与人CD59的结合力高.测序后, 得到3个高度同源的氨基酸序列.DNAstar分析显示, 3个序列均与已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性.结论: 获得的序列H×A××××××P××为设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽封条提供了技术基础.
-
人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备
目的:构建人CD59真核及原核表达质粒,并制备抗人CD59多克隆抗体,以用于研究糖蛋白CD59生物学功能.方法:用RT-PCR技术从人PBMCs中获取hCD59全长及其胞外区hsCD59 cDNA序列,分别克隆至pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体.重组融合蛋白GST-hsCD59由经IPTG诱导的大肠杆菌BL21表达后纯化并鉴定.用pVAX-1-hCD59质粒免疫家兔并用纯化的GST-hsCD59融合蛋白加强免疫制备兔抗人CD59多克隆抗体并测定其效价.结果:成功构建人CD59真核表达质粒pVAX-1-hCD59和原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59.融合蛋白GST-hsCD59在大肠杆菌中高效表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值一致.制备的兔抗人CD59多克隆抗体效价为1:3 200.结论:成功地构建了重组真核表达质粒pVAX-1-hCD59及原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59,获得了兔抗人CD59多克隆抗体,这将有助于我们深入研究CD59在人类疾病中的生物学功能.
