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表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)文献资料
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人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测
目的 构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1 R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1R β-PKD融合蛋白,并检测其活性.方法 用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1R β-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体.重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用.结果 构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate 菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1R β-PKD可以和MEMO相互作用.结论 成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1R β-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白.
