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气相色谱-质谱联用法测定小鼠血清非胆固醇甾醇
目的 本研究旨在建立气相色谱-质谱联用法(gas chromatograph-mass spectrometer,GC-MS)测定小鼠血清中非胆固醇甾醇的方法.方法 采集32周龄雄性C57BL/6J小鼠血清,以5α-胆甾烷为内标,经过氢氧化钾乙醇溶液皂化、正己烷萃取、硅烷化试剂衍生等步骤,进行小鼠血清样本进样前处理.运用气相色谱-质谱联用仪对小鼠血清非胆固醇甾醇进行定性及定量分析.配制不同浓度混标溶液进行GC-MS法分析制备标准曲线.制备高、中、低浓度混标溶液与等量小鼠血清混合处理后测定非胆固醇甾醇含量,进行加标回收率、精密度及重复性试验.采用酶比色法测定小鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)含量.结果 GC-MS法测得小鼠血清角鲨烯(squalene)、去氢胆甾醇(desmosterol)、菜油甾醇(campesterol)、豆甾醇(stigmasterin)和β-谷甾醇(β-sitosterol)的含量依次为(4.52±0.94、1.71 ±1.57、22.17±9.86、0.69±0.05和8.82±3.92)μg/mL;标准化后角鲨烯/TC、去氢胆甾醇/TC、菜油甾醇/TC、豆甾醇/TC和β-谷甾醇/TC,分别为(5.92 ±2.06、1.89±2.26、26.52±9.54、0.90±0.18和9.08±5.51)μg/mg,平均加标回收率依次为95.65％、96.75％、99.14％、103.52％和100.57％,日内精密度及重复性试验相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均在5.00％以下.结论 GC-MS法具有检测速度快、结果准确、精密性高和重复性好的优点,可用于实验小鼠血清非胆固醇甾醇的检测,为深入研究实验动物胆固醇合成和吸收的机制提供研究手段.
