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M14细胞文献资料
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AY358935基因真核表达质粒的构建及鉴定
目的 构建AY358935基因的真核表达质粒并进行初步鉴定.方法 以逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT PCR)扩增AY358935基因的cDNA,将该片段克隆进pGEM-Teasy载体;以测序正确的pGEM-T-AY重组质粒为模板构建pcDNA3.1-AY真核表达质粒,并进行双酶切鉴定.以pcDNA3.LAY瞬时转染M14细胞,Western印迹法和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]比色法分别检测转染细胞AY358935蛋白表达水平及细胞增殖力.结果 RT-PCR扩增片段符合AY358935基因cDNA大小,与pcDNA3.LAY克隆区酶切片段一致.对pGEM-T-AY质粒克隆区测序,结果也与AY358935基因cDNA序列相同.M14细胞分别转染AY358935基因、pcDNA3.1和脂质体48h后,AY358935基因组蛋白表达水平明显高于其余两组,且AY358935基因组细胞A值(0.74)也明显高于其余两组(0.39和0.46),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AY358935基因的真核表达质粒pcDNA3.1-AY构建成功,AY358935基因可能具有促进M14细胞增殖的作用.
关键词： AY358935基因 真核表达质粒构建 M14细胞
