您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
抗体重链可变区文献资料
-
扩增抗体重链可变区的一个高效方法
从杂交瘤细胞或脾细胞中扩增抗体可变区,是构建单链抗体(Single-chain Fv fragment, ScFv)、克隆单克隆抗体和研究抗原与抗体相互作用的关键一步.而抗体可变区(Variable regions, Fv)高度变异,扩增相对困难,至今仍是一个难点,有待解决.我们在构建ScFv过程中,发现2株杂交瘤细胞用普通方法难于扩增出抗体重链可变区(Heavy-chain variable region ,VH)抗体.于是提出了一种多序列比对和简并引物设计算法,并加以实现,设计出通用的鼠源性抗体VH引物;应用上述引物,采用反向多聚酶链反应(Reverse polymerase chain reaction, reverse PCR)方法--3'RACE 和 5'RACE法, 准确地扩增出2株杂交瘤细胞的VH基因.该算法很好地解决了引物特异性和小化问题,具有简单、实现容易的特点,可用于基因家族中未知基因克隆和文库构建中的引物设计.与反向PCR方法结合,提高了难扩增的未知基因的成功率.
