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制备和纯化文献资料
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猪CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用研究
目的 研究CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用.方法 生物学软件分析猪CD163分子的结构,将其胞外区分为4个片段进行扩增,分别克隆到PET-32a原核表达载体中构建4种重组表达质粒并获得4种融合蛋白,用这4种融合蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA方法检测4种多抗克隆抗体效价分别为1∶10 240、1∶12 800、1∶25 600和1∶12 800.饱和硫酸铵盐析法和DE-52离子交换层析技术二步法提取并纯化得到4种纯度较高的特异性抗体.用制备的4种抗体以及4种抗体的混合物分别封闭PAM细胞1h,经PRRSV感染24 h和48 h,用已建立的绝对荧光定量PCR方法检测感染细胞中PRRSV的mRNA水平,用GraphPad Prism 5软件进行处理所得到的数据.结果 鼠抗猪CD 163-P3抗体能够阻碍PRRSV感染PAM细胞,提示CD163-P3 (SRCR5-6)可能参与PRRSV感染PAM细胞过程,其他片段不影响PRRSV感染宿主过程.结论 用本试验方法所制备和纯化的抗体具有生物学活性,且CD163在PRRSV感染宿主细胞过程中发挥作用,发挥功能作用的部分是CD163-P3(SRCR5-6).
