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悬浮芯片法与生物素-亲和素ELISA法检测炭疽杆菌芽孢比较研究
[目的]建立快速、敏感、特异、高通量、同时检测多种病原体的技术方法.[方法]建立基于双抗体夹心免疫学检测的编码微球悬浮芯片和生物素-亲和素ELISA方法,比较2种方法对炭疽芽孢杆菌定量检测以及直接从"白色粉末"样品中检测的能力.[结果]悬浮芯片对炭疽杆菌芽孢检测具有很好的敏感性和特异性,低检出限为4.2×103cfu/ml,动态范围为103～107cfu/ml;生物素-亲和素ELISA低可以检测到1.4×104cfu/ml,线性范围为104～107cfu/ml.[结论]悬浮芯片方法检测炭疽杆菌芽孢比ELISA方法具有更高的灵敏度和更宽的动态检测范围,在病原菌的早期识别、快速诊断、应对生物恐怖威胁、控制传染病爆发中具有广阔的应用前景.
关键词： 悬浮芯片 生物素-亲和素ELISA 芽孢杆菌 炭疽 定量检测 -
定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价
目的:建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)方法并评价其可靠性.方法:优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等.结果:CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,佳封闭液为1％ BSA-PBST,抗原与包被抗体佳反应时间60 min,底物显色佳时间15 min.批内、批间变异系数分别为2.16％ ～ 9.23％和2.29％ ～ 11.71％,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962.结论:成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点.
关键词： CFTR蛋白 CFTR多克隆抗体 生物素-亲和素ELISA
