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血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响
目的 用外源性血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGF-D)体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨细胞(osteoclasts,OCs)分化过程的影响.方法 采集外周血并分离单个核细胞,实验分为3组:阳性对照组为NF-κB配体激活因子(receptor or activator of NF-κB Ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)联合诱导,阴性对照组(细胞培养基)和实验组(PDGF-D).应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞(osteoclast like cells,OLCs)的分化情况,Real-time PCR检测破骨细胞标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的表达情况,Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达.结果 ①TRAP染色可见阳性对照组和实验组的OLCs显著多于阴性对照组.②阳性对照组和实验组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著高于阴性对照组(P＜0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P＞0.05).③阳性对照组和实验组MMP-9(ELISA检测)、Cathepsin K蛋白(Western blot检测)表达均显著高于阴性对照组(P＜0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P＞0.05).结论 外源性PDGF-D可在无RANKL/M-CSF的条件下于体外独立诱导破骨前体细胞向OLCs分化.
关键词： 破骨细胞 NF-κB配体激活因子 血小板衍生生长因子D
