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凝胶电泳迟滞分析文献资料
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核因子κB诱捕物寡核苷酸对肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响
目的研究核因子(NF)κB结合位点诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)对肾小管上皮细胞的NF-κB活性及下游炎症因子表达的影响.方法(1)鱼精蛋白-脂质体法转染NF-κB decoyODN:将NF-κB decoy ODN与鱼精蛋白、脂质体混合,转染至TNF-α刺激培养的大鼠肾小管上皮细胞内,测定转染率.(2)凝胶电泳迟滞分析测定转染NF-κB decoy ODN后细胞NF-κB活性.(3)RT-PCR方法检测转染NF-κB decoy ODN后细胞ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-1以及MCP-1 mRNA表达水平.结果当+/-比例为4时,鱼精蛋白-脂质体法转染率高达93.20%;转染NF-κB decoy ODN可抑制TNF-α激活的NF-κB活性,从而进一步抑制ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA表达.结论(1)鱼精蛋白-脂质体法是一种不受血清影响的高效率转染方法.(2)NF-κB decoy ODN在体外通过抑制NF-κB活性,进而影响肾小管上皮细胞炎症因子的表达.
关键词： 核因子κB诱捕物寡核苷酸 鱼精蛋白-脂质体 转染 凝胶电泳迟滞分析
