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等位基因PCR文献资料
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建立基于脱氧次黄嘌呤核苷修饰等位基因PCR方法检测EGFR基因热点突变
目的 建立基于脱氧次黄嘌呤修饰等位基因特异荧光聚合酶链反应(dI-AS-PCR)方法,检测表皮生长因子受体(EGFR)基因热点突变L858R和19del(2235 ～ 2249,2236～2250).方法 设计包含扩增EGFR基因L858R和19del热点突变在内的特异性引物、荧光探针和内参体系;且特异检测基因突变的等位基因PCR引物3'-末端n-1或n-2位置采用脱氧次黄嘌呤(dI)修饰.建立标准品和质控样品,应用荧光PCR检测,并分析结果.结果 dI-AS-PCR能够在野生型背景下检测低于0.1％的突变,对50例肺癌临床样本进行检测,有9例(18％)EGFR基因发生L858R突变,14(28％)例19del基因突变.EGFR基因热点突变率为46％,其检测结果与DNA测序完全一致.结论 基于dI-AS-PCR技术的特异荧光PCR检测EGFR基因热点突变,敏感性高,特异性强,可以应用于临床EGFR基因突变检测,指导个性化用药及酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗耐药监测.
