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压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中bcl-2、bax及p53mRNA表达的影响
目的:通过检测不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglioncells,RGCs)中bcl-2,bax,p53mRNA表达情况,了解压力对视网膜神经节细胞凋亡的影响.方法:用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法[1]培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs;在纯化培养的RGCs上分别施加0,20mmHg,40mmHg,60mmHg和80mmHg气压,培养24h及48h后TUNEL法检测各组细胞的凋亡,原位杂交检测细胞中bcl-2,bax及p53mRNA的表达.结果:纯化的RGCs培养12h及24h用羊抗鼠FITC-Thy-1.1单克隆抗体进行鉴定阳性,纯度为97%.传三代后星型胶质细胞用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体标记和鉴定阳性.培养24h组TUNEL法检测对照组极少数细胞凋亡,20mmHg组见较多细胞凋亡,随着压力的增高细胞凋亡数增多,凋亡指数增高;与对照组相比差异均有显著性.培养48h组压力≥20mmHg各组较相同压力培养24h组凋亡指数增高,差异有显著性(P<0.05).压力≥40mmHg时bcl-2 mRNA表达逐渐减少,压力≥20mmHg时bax及p53 mRNA表达则逐渐增加;与对照组相比均有显著性差异(P<0.05).结论:高于20mmHg压力时间超过24h可激活体外培养的视网膜神经节细胞的相关凋亡基因导致细胞的凋亡.