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多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1基因表达对体外垂体瘤细胞株RC-4B/C生物学功能的影响
目的 观察多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)基因表达对体外垂体瘤细胞株RC-4B/C的增殖凋亡和生物学功能的影响.方法 应用基因转录方法检测LRIG1基因表达对体外垂体瘤细胞株RC-4B/C的抗增殖作用和生物学功能的影响;通过免疫组织化学法和Westernblot技术检测LRIG1蛋白在RC-4B/C细胞中的表达水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定转染后RC-4B/C细胞中Ras、Raf、蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK) mRNA表达变化,并通过噻唑蓝(MTT)法、划痕实验、苏木素-伊红(HE)染色、显微镜等观察比较转染LRIG1基因的RC-4B/C细胞的的迁移能力、增殖凋亡和形态学改变.结果 Western blot和免疫组织化学法证实转染后RC-4B/C细胞中LRIG1稳定表达;RT-PCR证实转染后RC-4B/C细胞中Ras、Raf和Akt mRNA水平显著降低(P＜0.01),分别为0.87±0.17、0.46 ±0.11、0.92±0.25.MTT法结果表明随着LRIG1与RC-4B/C细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P＜0.01).划痕实验结果显示:LRIG1转染的RC-4B/C细胞迁移能力低于正常RC-4B/C细胞.LRIG1作用于垂体瘤细胞24 h后,形态学观察垂体瘤细胞发生凋亡或坏死.结论 LRIG1基因转染对体外垂体瘤细胞株RC-4B/C细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用,其可能是通过抑制表皮生长因子受体(EGFR)和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)信号传导通路中的磷酸肌醇3激酶(PI3K)/Akt和Ras/Raf/ERK两条重要信号通路分子的活性来发挥作用.
关键词： 垂体瘤 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1基因 增殖
