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CD40单链抗体影响辅助性T淋巴细胞平衡增强抗肿瘤免疫的研究
目的 探讨CD40单链抗体(CD40ScFv)对辅助性T淋巴细胞(Th1)平衡的影响及其发挥抗肿瘤作用机制.方法 根据已获得的CD40ScFv基因片段,构建pET28a-CD40ScFv重组质粒,将重组质粒转化后诱导表达获得功能性CD40ScFv蛋白.体外诱导培养树突状细胞(DC)检测C40ScFv对其活化成熟的促进作用,与CD4+T淋巴细胞共培养后,检测共培养液中Th1/Th2比例.构建小鼠荷瘤模型,予CD40ScFv治疗并设立对照,观察并记录肿瘤体积变化,检测肿瘤微环境中白细胞介素-12(IL-12)浓度和Th1/Th2比例.结果 成功构建pET28a-CD40ScFv重组质粒及诱导表达CD40ScFv.不同条件激活的DC培养液中CD40ScFv组DC活化程度显著高于PBS组(CD80:P=0.001,CD86:P =0.000),同时DC培养液上清中CD40ScFv组IL-12浓度为(674.37±73.59) pg/ml,显著高于PBS组(309.45±40.91) pg/ml(P =0.001),而与阳性对照组比较差异无统计学意义(P=0.737).DC与CD4+T细胞混合培养液中CD40ScFv实验组的Th1/Th2比值(9.98±1.78)显著高于PBS组(2.75 ±0.49) (P =0.003),而与肿瘤坏死因子(TNF)-α组比较差异无统计学意义(P=0.872).小鼠肿瘤微环境中CD40ScFv组IL-12的浓度[(396.27±48.13) pg/ml]显著高于NS组[(79.51 ±14.97) pg/ml] (P =0.000),同时CD40ScFv组的Th1/Th2细胞比值为6.32±0.87,显著高于NS组(1.79 ±0.38) (P=0.000),而与激动型CD40mAb组比较差异无统计学意义(P=0.400).结论 构建pET28a-CD40ScFv重组质粒经诱导后可表达功能性CD40ScFv蛋白.CD40ScFv在体外通过促进DC的活化与成熟,诱导Th1细胞的极化,调整Th1/Th2比例,进而发挥抑制肿瘤增殖的作用.
