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微小RNA-96对结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-96对SW620结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SW620、SW480、HT-29、HCT116、LoVo、CaCo-2结直肠癌细胞,NCM-460正常结肠上皮细胞中miR-96的表达,应用LipofectamineTM 3000将miR-96抑制物、miR-96阴性对照(NC)转染到SW620细胞,Real-timePCR检测miR-96表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力,Westem blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad4蛋白表达.结果 Real-time PCR结果表明miR-96在SW620(2.42 ±0.20)、SW480(1.75±0.12)、HT-29(1.43±0.11)、HCT116(1.52±0.12)、LoVo(1.73±0.14)、CaCo-2(1.36±0.13)结直肠癌细胞中的表达量显著高于NCM-460 (0.39±0.02)细胞(P均＜0.01),miR-96抑制物组(0.45±0.03) miR-96表达量较miR-96 NC组(2.35±0.32)降低(P＜0.01).CCK-8实验结果表明miR-96抑制物组(0.389±0.034)细胞活力较miR-96 NC组(0.586±0.058)降低(P＜0.01).Transwell实验结果表明miR-96抑制物组[(28.37±2.84)个]细胞迁移数目较miR-96 NC组[(128.45±12.84)个]减少(P＜0.01),miR-96抑制物组侵袭数目[(23.60± 2.30)个]较miR-96 NC组[(133.57±13.36)个]减少(P＜0.01).Western blot结果表明miR-96抑制物组中MMP-2、MMP-9、Vimentin、TGF-β1、p-Smad4表达量较miR-96 NC组下调(P均＜0.01),miR-96抑制物组中E-cadherin表达量较miR-96 NC组上调(P＜0.01).结论 下调miR-96表达能显著抑制SW620结肠癌细胞迁移及侵袭,与抑制TGF-β1/Smad4信号通路有关.
关键词： 微小RNA-96 结肠癌 迁移 侵袭 转化生长因子-β1/Smad4信号通路
