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SEAP文献资料
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分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP-IQCE3'UTR的构建
目的 构建分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase reporter gene,SEAP)报告基因重组载体pSEAP-IQCE3'UTR,为鉴定FXR1P是否是通过与IQCE的3'UTR发生相互作用,进一步探索FXR1P的功能奠定基础.方法 首先设计目的基因片段IQCE3'UTR的PCR引物,然后通过RT-PCR扩增IQCE基因3'UTR基因片段,酶切扩增的片段和报告基因空载体,并将空载体去磷酸化,去磷酸化后的空载体与目的基因片段进行连接反应,将连接产物转化人大肠埃希菌JM109,后筛选阳性克隆,PCR鉴定插入序列的正反.结果 构建了分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP-IQCE3'UTR,经酶切鉴定、正反鉴定和测序分析可知重组载体构建成功.结论 成功构建了分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP-IQCE3'UTR,为进一步探索FXR1P的功能及其在脆性X综合征中的发病机理有着重要的意义.
