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心脏α肌动蛋白1基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响
目的 探讨心脏 α肌动蛋白1(ACTC1)基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响.方法 培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2;在大鼠胚胎心肌细胞H9C2中转染ACTC1-小干扰RNA(siRNA),分别于转染后24 h、48 h、72 h收集细胞,提取纯化RNA,采用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测ACTC1基因表达水平;采用脱氧核苷酸原位末端标记法检测转染ACTC1-siRNA后ACTC1基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响;应用Western blot法分析凋亡相关基因蛋白细胞色素C(Cyto-C)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9及Bax/Bcl-2的表达.结果 qPCR检测转染ACTC1-siRNA后24 h、48 h、72 h ACTC1 mRNA表达水平,与转染阴性对照siRNA组比较,ACTC1基因的mRNA表达水平均有下调趋势(0.80比1.00、0.20比1.00、0.25比1.00),转染后48 h、72 h组下降明显,48 h组显著,差异有统计学意义(t=4.245,P<0.05);与转染阴性对照siRNA组凋亡率(20％)比较,转染ACTC1-siRNA组凋亡率(80％)显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);转染ACTC1-siRNA组Caspase-3、Caspase-9、Cyto-C及Bax/Bcl-2表达增高,与转染阴性对照siRNA组比较(0.91±0.12比0.59±0.01,0.48±0.09比0.24±0.03,0.92±0.03比0.45±0.01,2.25±0.26比1.16±0.12),差异均有统计学意义(t=2.821、7.336、2.420、0.798,均P<0.05);2组Caspase-8表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 ACTC1基因表达下调可能主要通过内源性线粒体信号转导途径,诱导大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡.
关键词： 心脏α肌动蛋白1基因 细胞凋亡 线粒体信号转导途径
