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HSPC016的表达、纯化与生物学活性分析
目的: 测定大肠杆菌中造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells, HSPC)016融合蛋白的表达,纯化及其生物学活性.方法: 采用PCR技术从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出目的基因HSPC016重组到质粒pET-22b(+)中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍离子亲和层析和分子筛法纯化;用胰蛋白酶消化对数期生长的第3代和第9代DPC,细胞记数法记录生长曲线.结果: 原核表达载体pET-22b(+)/HSPC016在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白表达率约28%,纯化后纯度达95%以上;经重组蛋白处理的DPC增殖活跃;细胞记数结果初步证实HSPC016重组蛋白能促进第9代DPC的增殖及其DNA合成,对第3代DPC无明显作用.结论: HSPC016基因在大肠杆菌中得到了高效表达;HSPC016重组蛋白具有促进高传代DPC增殖的作用.
关键词： HSPC016重组蛋白 细胞记数
