首页 > 文献资料
-
恙虫病东方体47kDa蛋白基因部分片段的克隆与表达
目的表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)47kDa保护性抗原蛋白.方法采用PCR方法,从Ot Karp株基因组DNA中扩增出47kDa蛋白基因片段,鉴定后将该片段克隆于原核表达载体pBV220,构建成重组质粒pBV-47.用该重组质粒转化E.coli,转化子在42℃诱导表达并对其鉴定.结果 (1)获得长约1430bp的PCR片段,序列分析结果与已知47kDa基因序列相同;(2)SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量40×103处有表达带;(3)经薄层扫描分析,目的蛋白占全菌蛋白的19%;(4)免疫印迹实验证明其具有免疫反应性.结论获得了47kDa基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达,表达产物具有免疫反应性.
-
恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆与表达
目的:克隆表达恙虫病东方体( Orientia tsutsugamushi,Ot )Karp株47kDa表面蛋白的成熟肽,探索其作为疫苗及诊断抗原的可能性.方法:采用PCR方法,从Ot Karp株菌种基因组DNA中扩增出47kDa成熟蛋白基因片段,将该片段克隆于原核表达载体pQE30,构建成重组质粒pQE30/47,转化大肠杆菌( E.coli ),经IPTG诱导表达,SDS_PAGE和Western_blotting检测目的蛋白的表达.结果:①获得长约1272bp的Ot Karp株47kDa外膜蛋白基因;②SDS_PAGE和免疫印迹显示该重组质粒转化的E.coli有一相对分子量约为4.3×104的独特蛋白带;③重组表达质粒序列分析结果显示pQE30/47中插入的基因片段的序列与已报告的Ot Karp株47kDa外膜蛋白基因序列基本一致,并与已知序列相同.结论:获得了Ot Karp 47kDa蛋白基因,并在E.coli中实现了表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性.
关键词： 恙虫病东方体Karp株 47kDa基因 克隆 表达
