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Tsunagi文献资料
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日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的获得、表达及初步鉴定
目的 获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法 应用简并引物PCR和5'端、3'端锚定PCR,扩增得到日本血吸虫Tsunagi基因的完整开放阅读框(Open reading frame, ORF).将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western Blotting对表达蛋白进行初步鉴定.结果 获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的完整ORF,序列全长为531bp,编码177个氨基酸.构建的重组质粒pET28a-SjTsunagi在大肠杆菌中获得了可溶性表达;以重组蛋白免疫小鼠获得效价为1∶51 200的多克隆抗体,Western Blotting证实抗体可特异性识别目的 蛋白.结论 成功获得日本血吸虫Tsunagi蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了Tsunagi基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础.
