您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
线虫抗凝血蛋白文献资料
-
线虫抗凝血蛋白AcaNAP7基因克隆、表达及抗凝活性鉴定
目的 在大肠杆菌中表达犬钩虫线虫抗凝血蛋白NAP7 (AcaNAP7) 成熟蛋白,并鉴定表达产物的抗凝活性.方法 根据AcaNAP7的核苷酸序列设计引物,从克隆质粒pUCm-T/AcaNAP7中扩增编码 AcaNAP7成熟蛋白的基因;扩增产物经双酶切定向克隆到原核表达载体PET-32a中;构建的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达;表达产物经镍琼脂糖凝胶FF纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化的部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝血活性.结果 克隆了编码 AcaNAP7成熟蛋白的基因并构建了重组表达质粒pET-32a/AcaNAP7;在大肠杆菌BL21(DE3) 中高效地表达了融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白,产物主要以可溶形式存在;镍琼脂糖凝胶亲和纯化获得了纯度高达92%的目的蛋白;纯化产物能明显延长PT及aPTT,其延长PT比延长aPTT更有效.结论 在大肠杆菌中成功表达了AcaNAP7融合蛋白,表达产物具有抗凝活性.该实验为进一步研究AcaNAP7的功能及应用奠定了基础.
